2019.5

We synthesized:

BBa_K3126001 (promoter TEF1)

BBa_K3126002 (promoter GPM1)

BBa_K3126003 (promoter TDH3)

BBa_K3126004 (promoter TEF2)

BBa_K3126005 (hexa-His gene)

BBa_K3126006 (nixA gene)

BBa_K3126007 (TgMTP1t2 gene)

BBa_K3126008 (kanR gene)

BBa_K3126010 (terminator CYC1)

BBa_K3126011 (terminator TDH1)

BBa_K3126013 (terminator ENO2)

GAATTCGCGGCCGCTTCTAGAGGGTCTCATGTCTATCCCAGAAACTCAAAAAGGTGTTATCTTCTACGAATCCCCCTTGCCAACAGGGAGTTCTTCAGAGACATGGAGGCTCAAAACGAAATTATTGACAGCCTAGACATCAATAGTCATACAACAGAAAGCGACCACCCAACTTTGGCTGATAATAGCGTATAAACAATGCATACTTTGTACGTTCAAAATACAATGCAGTAGATATATTTATGCATATTACATATAATACATATCACATAGGAAGCAACAGGCGCGTTGGACTTTTAATTTTCGAGGACCGCGAATCCTTACATCACACCCAATCCCCCACAAGTGATCCCCCACACACCATAGCTTCAAAATGTTTCTACTCCTTTTTTACTCTTCCAGATTTTCTCGGACTCCGCGCATCGCCGTACCACTTCAAAACACCCAAGCACAGCATACTAAATTTCCCCTCTTTCTTCCTCTAGGGTGTCGTTAATTACCCGTACTAAAGGTTTGGAAAAGAAAAAAGACACCGCCTCGTTTCTTTTTCTTCGTCGAAAAAGGCAATAAAAATTTTTATCACGTTTCTTTTTCTTGAAAATTTTTTTTTTTGATTTTTTTCTCTTTCGATGACCTCCCATTGATATTTAAGTTAATAAACGGTCATCAATTTCTCAAGTTTCAGTTTCATTTTTCTTGTTCTATTACAACTTTTTTTACTTCTTGCTCATTAGAAAGAAAGCATAGCAATCTAATCTAAGTTTTAATTACAAAGGATCCTCATGTAATTAGTTATGTCACGCTTACATTCACGCCCTCCCCCCACATCCGCTCTAACCGAAAAGGAAGGAGTTAGACAACCTGAAGTCTAGGTCCCTATTTATTTTTTTATAGTTATGTTAGTATTAAGAACGTTATTTATATTTCAAATTTTTCTTTTTTTTCTGTACAGACGCGTGTACGCATGTAACATTATACTGAAAACCTTGCTTGAGAAGGTTTTGGGACGCTCGAAGGCTTTAATTTGCAGGCCTTACTAGTAGCGGCCG

GAATTCGCGGCCGCTTCTAGAGGGTCTCATGTCTATCCCAGAAACTCAAAAAGGTGTTATCTTCTACGAATCCCGCCAAACTTTTCGGTTAACACATGCAGTGATGCACGCGCGATGGTGCTAAGTTACATATATATATATATATATATATATATATATATATAGCCATAGTGATGTCTAAGTAACCTTTATGGTATATTTCTTAATGTGGAAAGATACTAGCGCGCGCACCCACACACAAGCTTCGTCTTTTCTTGAAGAAAAGAGGAAGCTCGCTAAATGGGATTCCACTTTCCGTTCCCTGCCAGCTGATGGAAAAAGGTTAGTGGAACGATGAAGAATAAAAAGAGAGATCCACTGAGGTGAAATTTCAGCTGACAGCGAGTTTCATGATCGTGATGAACAATGGTAACGAGTTGTGGCTGTTGCCAGGGAGGGTGGTTCTCAACTTTTAATGTATGGCCAAATCGCTACTTGGGTTTGTTATATAACAAAGAAGAAATAATGAACTGATTCTCTTCCTCCTTCTTGTCCTTTCTTAATTCTGTTGTAATTACCTTCCTTTGTAATTTTTTTTGTAATTATTCTTCTTAATAATCCAAACAAACACACATATTACAATAGGATCCATAAAGCAATCTTGATGAGGATAATGATTTTTTTTTGAATATACATAAATACTACCGTTTTTCTGCTAGATTTTGTGATGACGTAAATAAGTACATATTACTTTTTAAGCCAAGACAAGATTAAGCATTAACTTTACCCTTTTCTTTCTAAGTTTCAATATTAGTTATCACTGTTTAAAAGTTATGGCGAGAACGTCGGCGGTTAAAATATATTACCCTGAACGAGGCCTTACTAGTAGCGGCCGCTGCAG

GAATTCGCGGCCGCTTCTAGAGGGTCTCATGTCTATCCCAGAAACTCAAAAAGGTGTTATCTTCTACGAATCCCCAGTTCGAGTTTATCATTATCAATACTGCCATTTCAAAGAATACGTAAATAATTAATAGTAGTGATTTTCCTAACTTTATTTAGTCAAAAAATTAGCCTTTTAATTCTGCTGTAACCCGTACATGCCCAAAATAGGGGGCGGGTTACACAGAATATATAACATCGTAGGTGTCTGGGTGAACAGTTTATTCCTGGCATCCACTAAATATAATGGAGCCCGCTTTTTAAGCTGGCATCCAGAAAAAAAAAGAATCCCAGCACCAAAATATTGTTTTCTTCACCAACCATCAGTTCATAGGTCCATTCTCTTAGCGCAACTACAGAGAACAGGGGCACAAACAGGCAAAAAACGGGCACAACCTCAATGGAGTGATGCAACCTGCCTGGAGTAAATGATGACACAAGGCAATTGACCCACGCATGTATCTATCTCATTTTCTTACACCTTCTATTACCTTCTGCTCTCTCTGATTTGGAAAAAGCTGAAAAAAAAGGTTGAAACCAGTTCCCTGAAATTATTCCCCTACTTGACTAATAAGTATATAAAGACGGTAGGTATTGATTGTAATTCTGTAAATCTATTTCTTAAACTTCTTAAATTCTACTTTTATAGTTAGTCTTTTTTTTAGTTTTAAAACACCAAGAACTTAGTTTCGAATAAACACACATAAACAAACAAAGGATCCATTGAATTGAATTGAAATCGATAGATCAATTTTTTTCTTTTCTCTTTCCCCATCCTTTACGCTAAAATAATAGTTTATTTTATTTTTTGAATATTTTTTATTTATATACGTATATATAGACTATTATTTATCTTTTAATGATTATTAAGATTTTTATTAAAAAAAAATTCGCTCCTCTTTTAATGCCTTTATGCAGTTTTTTTTTCCCATTCGATATTTCTATGTAGGCCTTACTAGTAGCGGCCGCTGCAG

GAATTCGCGGCCGCTTCTAGAGTTGATAGGTCAAGATCAATGTAAACAATTACTTTGTTATGTAGAGTTTTTTTAGCTACCTATATTCCACCATAACATCAATCATGCGGTTGCTGGTGTATTTACCAATAATGTTTAATGTATATATATATATATATATATGGGGCCGTATACTTACATATAGTAGATGTCAAGCGTAGGCGCTTCCCCTGCCGGCTGTGAGGGCGCCATAACCAAGGTATCTATAGACCGCCAATCAGCAAACTACCTCCGTACATTCATGTTGCACCCACACATTTATACACCCAGACCGCGACAAATTACCCATAAGGTTGTTTGTGACGGCGTCGTACAAGAGAACGTGGGAACTTTTTAGGCTCACCAAAAAAGAAAGAAAAAATACGAGTTGCTGACAGAAGCCTCAAGAAAAAAAAAATTCTTCTTCGACTATGCTGGAGGCAGAGATGATCGAGCCGGTAGTTAACTATATATAGCTAAATTGGTTCCATCACCTTCTTTTCTGGTGTCGCTCCTTCTAGTGCTATTTCTGGCTTTTCCTATTTTTTTTTTTCCATTTTTCTTTCTCTCTTTCTAATATATAAATTCTCTTGCATTTTCTATTTTTCTCTCTATCTATTCTACTTGTTTATTCCCTTCAAGGTTTTTTTTTAAGGAGTACTTGTTTTTAGAATATACGGTCAACGAACTATAATTAACTAAACGGATCCAGTGCTTTTAACTAAGAATTATTAGTCTTTTCTGCTTATTTTTTCATCATAGTTTAGAACACTTTATATTAACGAATAGTTTATGAATCTATTTAGGTTTAAAAATTGATACAGTTTTATAAGTTACTTTTTCAAAGACTCGTGCTGTCTATTGCATAATGCACTGGAAGGGGAAAAAAAAGGTGCACACGCGTGGCTTTTTCTTGAATTTGCAGTTTGAAAAATAAAGGGTCAAATCGTTGGTAGATACGTTGTTGACACTTCTAAATAAGAGACCTACTAGTAGCGGCCGCTGCAG

GGTCTCAATCTAAGTTTTAATTACAAAGGATCCATGAGATTCCCTAGTATCTTCACCGCCGTCTTGTTCGCTGCTAGTTCTGCTTTGGCTGCTCCAGTCAACACTACCACCGAAGACGAAACCGCTCAGATCCCAGCTGAAGCCGTCATCGGTTACCTTGACCTTGAGGGTGACTTCGATGTCGCCGTCCTTCCATTCTCTAACAGTACCAACAACGGTCTTTTGTTCATTAACACCACCATTGCTTCTATCGCCGCTAAGGAGGAGGGTGTCTCTCTTGACAAGAGACATCACCACCACCATCACAGTGCTAAGTCTAGTTTCATCTCTACCACCACTACCGACCTTACCTCTATCAACACCAGTGCCTACAGTACCGGTTCTATCTCTACCGTCGAAACCGGAAACAGAACCACCTCTGAGGTCATCTCTCATGTCGTCACCACCTCTACCAAGCTTAGTCCTACCGCCACCACCAGTCTTACCATCGCTCAAACTTCTATTTATAGTACCGACTCTAATATTACCGTCGGTACCGACATCCACACCACCAGTGAAGTCATCTCTGACGTCGAAACCATCTCTAGGGAAACCGCCTCTACCGTTGTTGCCGCCCCAACTTCTACCACTGGTTGGACCGGTGCCATGAACACTTACATCTCTCAATTCACTTCTTCTAGTTTTGCTACTATTAACTCTACCCCTATCATCTCTTCTAGTGCCGTCTTCGAAACCAGTGACGCCTCTATCGTCAACGTCCATACCGAGAACATCACCAACACTGCTGCCGTTCCATCTGAGGAGCCTACCTTCGTCAACGCCACTAGAAACTCTCTTAATTCTTTTTGTTCTTCTAAACAACCATCTTCTCCTAGTTCTTATACTTCTTCTCCTTTGGTTTCTTCTTTGTCTGTTTCTAAGACCTTGTTGTCTACCTCTTTCACCCCTTCTGTCCCAACTTCTAATACTTATATTAAGACCAAGAACACTGGTTACTTCGAGCACACTGCCTTGACCACCTCTAGTGTTGGATTGAATAGTTTCTCTGAAACCGCCGTCTCTAGTCAAGGTACCAAGATTGACACCTTTTTGGTTTCTAGTTTGATCGCCTACCCATCTTCTGCCTCTGGTTCTCAGCTTAGTGGTATCCAGCAAAATTTTACCTCTACTTCTTTGATGATCAGTACCTACGAGGGTAAGGCCAGTATCTTCTTCTCTGCCGAGTTGGGTTCTATTATTTTTTTGTTGCTTAGTTATTTGTTGTTTTAAAACGGGTACTGTACAGTTAGTACATTGAGTCGAAATATACGAAATTATTGTTCATAATTTTCATCCTGGCTCTTTTTTTCTTCAACCATAGTTAAATGGACAGTTCATATCTTAACTCTAATAATACTTTTCTAGTTCTTATCCTTTTCCGTCTCACCGCAGATTTTATCATAGTATTAAATTTATATTTTGTTCGTAAAAAGAAAAATTTGTGAGCGTTACCGCTCGTTTCATTACCCGAAGGCTGTTTCAGTAGACCACTGATTAAGTAAGTAGATGAAAAAATTTCATCACCATGAAAGAGTTCGATGAGAGCTACTTTTTCAAATGCTTAACAGCTAACCGCCATTCAATAATGTTACGCTCTCTTCATTCTGCGGCTACGTTATCTAACAAGAGGTTTTACTCTCTCATATCTCATTCAAATAGAAAGAACATAATCAAAAGGATCCTCATGTAATTAGTTATGTCACGAGACC

GGTCTCACAAACACACATATTACAATAGGATCCATGATTAAGTACCATGTCATGAAAGAAGGTTACATCTTGACTGTTTTTAAAAATGAAAGGTTGAGTTGGTTGCCATATATCGCCATCGTCATTTTGTTGCACGTTATTGGTTTCTCTTTCTTGTGGATCGCCGGTAAGGACCATCACATTTTGTTCGGTATGGGTATCCTTGCCTACACTCTTGGTTTGAGGCATGCCTTTGATGCCGACCATATCGCCGCTATCGACAACACCGTTAGAAAGTTGTTGCAGCAGAGAAAGGACCCATCTGGTGTCGGTTTCTACTTCTCTATTGGACATTCTTCTGTCGTCTTCTTGATGGCCGTTTTCCTTGGTGTCTCTGTCAAGTGGGCCAAGGACGAACTTCCTCACTTCCAAGATATCGGAGGTACCATTGGAACCCTTGTTTCTGGTTTTTTCTTGGTTCTTATTGGAGTTCTTAATCTTATTATTCTTATTTCTTTGATTAACTTGTTCGCCAAGTTGAGGAGGGAACACATCGAAGAAGCTGAGGTCGATGCCTTGTTGGAGTCTAGGGGTCTTGTCTCTAGGTTCGTCGGACCATACTTTAAGTTGATCACCAGAAGTTGGCACGTCTTGCCTCTTGGATTCCTTTTCGGATTGGGATTCGACACCGCTTCTGAGATCGCCTTGCTTGCCCTTAGTAGTGGAGCCTCTCAGCAAGCTATCTCTTTCATTGGTATTTTGTCTTTGCCTATCTTGTTCGCCAGTGGTATGAGTCTTCTTGACACCCTTGACGGTGTCGTCATGAAGTACGCCTACAACTGGGCCTTCTTCAACCCTATCAGAAAAATCTATTACAACATTACCATTACCGCCATCTCTGTTATGGCCGCCCTTGTTATCGGTATGATCGAATTGCTTCAAATTCTTGCCGACAAACTTGACTTGCATGGAGCCTTCTGGGCCTTCATTGGAAGTATCGAGTTCGATTATTTGGGTTATATCTTGGTTGCCTTGTTTCTTATTACTTGGTTGATCAGTTCTTTGATTTGGAAATTTGGAAGAATTGAACACAAATGGAGTAGATAAGGATCCATAAAGCAATCTTGATGAGGAGAGACC

GGTCTCAAACACACATAAACAAACAAAGGATCCATGGAGAGTTCTTCTCATATTATTGAAGTCAACGGAGGTAGATCTGACGAGGAAAGAAGGGCTGTCGCTAGTAAGGTCTGCGGAGAAGCTCCTTGCGGTTTCAGTGACGCTAAGAACGCTTCTGGTGACGCCCAAGAAAGGAACGCCTCTATGAGGAAATTGTGCATCGCCGTCGTCTTGTGCCTTGTCTTCATGTCTGTCGAGGTCGTTGGTGGTGTCAAGGCCAACAGTTTGGCCATCATGACCGATGCCGCTCATCTTTTGAGTGACGTTGCCGCTTTCGCCATCTCTTTGTTCAGTCTTTGGGCTGCCGGTTGGGAGGCTACCCCAAGGCACACCTACGGATTCTTCAGAATCGAAATTCTTGGAGCTCTTGTTTCTATCCAATTGATTTGGTTGCTTACTGGTATCCTTGTTTACGAGGCCATCATTAGACTTTTGACCGAAACCTCTGAGGTCAACGGTTTCTTGATGTTCGCTGTCGCCACTTTCGGTTTGCTTGTCAACATTATCATGGCTGTCATGCTTGGTCACGACCATGACAATGGTCACGGTCATAGTCACGGTGAGGACAAACACGATGAAGCCCATGGTGACGTCACTGAACAGCTTCTTGAAAAGCCAAAACAGCAGAAGGAAAAAAAGAAGAGGAACATCAACGCCCAAGGTGCCTATTTGCACGTCTTGGGTGACTCTATCCAGTCTGTCGGAGTCATGATCGGTGGTGCTGCTATCTGGTACAATCCAAAGTGGAAGATCATTGACTTGATCTGCACCTTGGTCTTCTCTGTCATCGTCTTGGGAACCACCATCAATATGATCAGAAGTATTCTTGAGGTCTTGATGGAGAGTACCCCAAGAGAAATCGACGCCACCAAGCTTGAGAAGGGTCTTCTTGAGATGGAGGAGGTCGTCGCTGTTCACGAATTGCACATCTGGGCCTCTACCGTTGGTAAGGTCTTGCTTGCTTGCCATGTCAACGCCAGACCAGATGCCGATGCCGATATGGTCCTTAACAAAGTCGTTGACTATATTAGGAGAGAATATAACATTTCTCATGTTACTATCCAAATTGAAAGATAAGGATCCATTGAATTGAATTGAAATCGAGAGACC

GGTCTCACGAACTATAATTAACTAAACGGATCCATAACTTCGTATAATGTATGCTATACGAAGTTATATGGGAAAGGAGAAGACCCACGTCAGTAGACCAAGGCTTAACAGTAACATGGACGCCGACTTGTACGGATACAAGTGGGCCAGAGACAACGTCGGTCAGTCTGGAGCTACCATCTATAGACTTTACGGAAAGCCAGACGCCCCAGAGTTGTTCCTTAAGCACGGTAAGGGATCTGTTGCCAACGACGTCACCGATGAGATGGTTAGACTTAACTGGCTTACCGAGTTCATGCCACTTCCAACCATCAAGCACTTCATTAGAACCCCAGATGACGCTTGGTTGTTGACCACTGCCATCCCCGGTAAGACCGCCTTTCAAGTTTTGGAAGAGTACCCAGACTCTGGAGAGAACATCGTTGACGCCTTGGCCGTCTTCCTTAGGAGGTTGCACTCTATCCCAGTTTGCAACTGCCCATTCAATAGTGATAGAGTCTTCAGACTTGCCCAAGCCCAGTCTAGGATGAACAACGGATTGGTCGATGCCTCTGACTTCGACGACGAGAGAAATGGATGGCCAGTCGAGCAAGTTTGGAAGGAGATGCATAAGCTTTTGCCTTTTTCTCCAGACAGTGTTGTCACCCACGGTGACTTTAGTTTGGACAACCTTATTTTCGACGAGGGTAAATTGATCGGTTGCATCGACGTCGGTAGAGTTGGTATCGCCGATAGATACCAAGACTTGGCCATCTTGTGGAACTGCTTGGGTGAGTTCTCTCCAAGTCTTCAAAAAAGATTGTTCCAAAAATATGGTATTGACAACCCAGATATGAATAAATTGCAATTTCATTTGATGTTGGATGAGTTTTTCTAAATAACTTCGTATAATGTATGCTATACGAAGTTATGGATCCAGTGCTTTTAACTAAGAATTAGAGACC

2019.6.1 ~ 6.10

Construction plasmids：

GTCCGGCAAAAAAGGGCAAGGTGTCACCACCCTGCCCTTTTTCTTTAAAACCGAAAAGATTACTTCGCGTTATGCAGGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCACAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGCTCGAGGCTTGGATTCTCACCAATAAAAAACGCCCGGCGGCAACCGAGCGTTCTGAACAAATCCAGATGGAGTTCTGAGGTCATTACTGGATCTATCAACAGGAGTCCAAGCGAGCTCGATATCAAATTACGCCCCGCCCTGCCACTCATCGCAGTACTGTTGTAATTCATTAAGCATTCTGCCGACATGGAAGCCATCACAAACGGCATGATGAACCTGAATCGCCAGCGGCATCAGCACCTTGTCGCCTTGCGTATAATATTTGCCCATGGTGAAAACGGGGGCGAAGAAGTTGTCCATATTGGCCACGTTTAAATCAAAACTGGTGAAACTCACCCAGGGATTGGCTGAGACGAAAAACATATTCTCAATAAACCCTTTAGGGAAATAGGCCAGGTTTTCACCGTAACACGCCACATCTTGCGAATATATGTGTAGAAACTGCCGGAAATCGTCGTGGTATTCACTCCAGAGCGATGAAAACGTTTCAGTTTGCTCATGGAAAACGGTGTAACAAGGGTGAACACTATCCCATATCACCAGCTCACCGTCTTTCATTGCCATACGAAATTCCGGATGAGCATTCATCAGGCGGGCAAGAATGTGAATAAAGGCCGGATAAAACTTGTGCTTATTTTTCTTTACGGTCTTTAAAAAGGCCGTAATATCCAGCTGAACGGTCTGGTTATAGGTACATTGAGCAACTGACTGAAATGCCTCAAAATGTTCTTTACGATGCCATTGGGATATATCAACGGTGGTATATCCAGTGATTTTTTTCTCCATTTTAGCTTCCTTAGCTCCTGAAAATCTCGATAACTCAAAAAATACGCCCGGTAGTGATCTTATTTCATTATGGTGAAAGTTGGAACCTCTTACGTGCCCGATCAACTCGAGTGCCACCTGACGTCTAAGAAACCATTATTATCATGACATTAACCTATAAAAATAGGCGTATCACGAGGCAGAATTTCAGATAAAAAAAATCCTTAGCTTTCGCTAAGGATGATTTCTGGAATTCGCGGCCGCTTCTAGAGGGTCTCATGTCTATCCCAGAAACTCAAAAAGGTGTTATCTTCTACGAATCCCCCTTGCCAACAGGGAGTTCTTCAGAGACATGGAGGCTCAAAACGAAATTATTGACAGCCTAGACATCAATAGTCATACAACAGAAAGCGACCACCCAACTTTGGCTGATAATAGCGTATAAACAATGCATACTTTGTACGTTCAAAATACAATGCAGTAGATATATTTATGCATATTACATATAATACATATCACATAGGAAGCAACAGGCGCGTTGGACTTTTAATTTTCGAGGACCGCGAATCCTTACATCACACCCAATCCCCCACAAGTGATCCCCCACACACCATAGCTTCAAAATGTTTCTACTCCTTTTTTACTCTTCCAGATTTTCTCGGACTCCGCGCATCGCCGTACCACTTCAAAACACCCAAGCACAGCATACTAAATTTCCCCTCTTTCTTCCTCTAGGGTGTCGTTAATTACCCGTACTAAAGGTTTGGAAAAGAAAAAAGACACCGCCTCGTTTCTTTTTCTTCGTCGAAAAAGGCAATAAAAATTTTTATCACGTTTCTTTTTCTTGAAAATTTTTTTTTTTGATTTTTTTCTCTTTCGATGACCTCCCATTGATATTTAAGTTAATAAACGGTCATCAATTTCTCAAGTTTCAGTTTCATTTTTCTTGTTCTATTACAACTTTTTTTACTTCTTGCTCATTAGAAAGAAAGCATAGCAATCTAATCTAAGTTTTAATTACAAAGGATCCTCATGTAATTAGTTATGTCACGCTTACATTCACGCCCTCCCCCCACATCCGCTCTAACCGAAAAGGAAGGAGTTAGACAACCTGAAGTCTAGGTCCCTATTTATTTTTTTATAGTTATGTTAGTATTAAGAACGTTATTTATATTTCAAATTTTTCTTTTTTTTCTGTACAGACGCGTGTACGCATGTAACATTATACTGAAAACCTTGCTTGAGAAGGTTTTGGGACGCTCGAAGGCTTTAATTTGCAGGCCTTACTAGTAGCGGCCGCTGCA

GTCCGGCAAAAAAGGGCAAGGTGTCACCACCCTGCCCTTTTTCTTTAAAACCGAAAAGATTACTTCGCGTTATGCAGGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCACAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGCTCGAGGCTTGGATTCTCACCAATAAAAAACGCCCGGCGGCAACCGAGCGTTCTGAACAAATCCAGATGGAGTTCTGAGGTCATTACTGGATCTATCAACAGGAGTCCAAGCGAGCTCGATATCAAATTACGCCCCGCCCTGCCACTCATCGCAGTACTGTTGTAATTCATTAAGCATTCTGCCGACATGGAAGCCATCACAAACGGCATGATGAACCTGAATCGCCAGCGGCATCAGCACCTTGTCGCCTTGCGTATAATATTTGCCCATGGTGAAAACGGGGGCGAAGAAGTTGTCCATATTGGCCACGTTTAAATCAAAACTGGTGAAACTCACCCAGGGATTGGCTGAGACGAAAAACATATTCTCAATAAACCCTTTAGGGAAATAGGCCAGGTTTTCACCGTAACACGCCACATCTTGCGAATATATGTGTAGAAACTGCCGGAAATCGTCGTGGTATTCACTCCAGAGCGATGAAAACGTTTCAGTTTGCTCATGGAAAACGGTGTAACAAGGGTGAACACTATCCCATATCACCAGCTCACCGTCTTTCATTGCCATACGAAATTCCGGATGAGCATTCATCAGGCGGGCAAGAATGTGAATAAAGGCCGGATAAAACTTGTGCTTATTTTTCTTTACGGTCTTTAAAAAGGCCGTAATATCCAGCTGAACGGTCTGGTTATAGGTACATTGAGCAACTGACTGAAATGCCTCAAAATGTTCTTTACGATGCCATTGGGATATATCAACGGTGGTATATCCAGTGATTTTTTTCTCCATTTTAGCTTCCTTAGCTCCTGAAAATCTCGATAACTCAAAAAATACGCCCGGTAGTGATCTTATTTCATTATGGTGAAAGTTGGAACCTCTTACGTGCCCGATCAACTCGAGTGCCACCTGACGTCTAAGAAACCATTATTATCATGACATTAACCTATAAAAATAGGCGTATCACGAGGCAGAATTTCAGATAAAAAAAATCCTTAGCTTTCGCTAAGGATGATTTCTGGAATTCGCGGCCGCTTCTAGAGGGTCTCATGTCTATCCCAGAAACTCAAAAAGGTGTTATCTTCTACGAATCCCGCCAAACTTTTCGGTTAACACATGCAGTGATGCACGCGCGATGGTGCTAAGTTACATATATATATATATATATATATATATATATATATAGCCATAGTGATGTCTAAGTAACCTTTATGGTATATTTCTTAATGTGGAAAGATACTAGCGCGCGCACCCACACACAAGCTTCGTCTTTTCTTGAAGAAAAGAGGAAGCTCGCTAAATGGGATTCCACTTTCCGTTCCCTGCCAGCTGATGGAAAAAGGTTAGTGGAACGATGAAGAATAAAAAGAGAGATCCACTGAGGTGAAATTTCAGCTGACAGCGAGTTTCATGATCGTGATGAACAATGGTAACGAGTTGTGGCTGTTGCCAGGGAGGGTGGTTCTCAACTTTTAATGTATGGCCAAATCGCTACTTGGGTTTGTTATATAACAAAGAAGAAATAATGAACTGATTCTCTTCCTCCTTCTTGTCCTTTCTTAATTCTGTTGTAATTACCTTCCTTTGTAATTTTTTTTGTAATTATTCTTCTTAATAATCCAAACAAACACACATATTACAATAGGATCCATAAAGCAATCTTGATGAGGATAATGATTTTTTTTTGAATATACATAAATACTACCGTTTTTCTGCTAGATTTTGTGATGACGTAAATAAGTACATATTACTTTTTAAGCCAAGACAAGATTAAGCATTAACTTTACCCTTTTCTTTCTAAGTTTCAATATTAGTTATCACTGTTTAAAAGTTATGGCGAGAACGTCGGCGGTTAAAATATATTACCCTGAACGAGGCCTTACTAGTAGCGGCCGCTGCA

GTCCGGCAAAAAAGGGCAAGGTGTCACCACCCTGCCCTTTTTCTTTAAAACCGAAAAGATTACTTCGCGTTATGCAGGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCACAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGCTCGAGGCTTGGATTCTCACCAATAAAAAACGCCCGGCGGCAACCGAGCGTTCTGAACAAATCCAGATGGAGTTCTGAGGTCATTACTGGATCTATCAACAGGAGTCCAAGCGAGCTCGATATCAAATTACGCCCCGCCCTGCCACTCATCGCAGTACTGTTGTAATTCATTAAGCATTCTGCCGACATGGAAGCCATCACAAACGGCATGATGAACCTGAATCGCCAGCGGCATCAGCACCTTGTCGCCTTGCGTATAATATTTGCCCATGGTGAAAACGGGGGCGAAGAAGTTGTCCATATTGGCCACGTTTAAATCAAAACTGGTGAAACTCACCCAGGGATTGGCTGAGACGAAAAACATATTCTCAATAAACCCTTTAGGGAAATAGGCCAGGTTTTCACCGTAACACGCCACATCTTGCGAATATATGTGTAGAAACTGCCGGAAATCGTCGTGGTATTCACTCCAGAGCGATGAAAACGTTTCAGTTTGCTCATGGAAAACGGTGTAACAAGGGTGAACACTATCCCATATCACCAGCTCACCGTCTTTCATTGCCATACGAAATTCCGGATGAGCATTCATCAGGCGGGCAAGAATGTGAATAAAGGCCGGATAAAACTTGTGCTTATTTTTCTTTACGGTCTTTAAAAAGGCCGTAATATCCAGCTGAACGGTCTGGTTATAGGTACATTGAGCAACTGACTGAAATGCCTCAAAATGTTCTTTACGATGCCATTGGGATATATCAACGGTGGTATATCCAGTGATTTTTTTCTCCATTTTAGCTTCCTTAGCTCCTGAAAATCTCGATAACTCAAAAAATACGCCCGGTAGTGATCTTATTTCATTATGGTGAAAGTTGGAACCTCTTACGTGCCCGATCAACTCGAGTGCCACCTGACGTCTAAGAAACCATTATTATCATGACATTAACCTATAAAAATAGGCGTATCACGAGGCAGAATTTCAGATAAAAAAAATCCTTAGCTTTCGCTAAGGATGATTTCTGGAATTCGCGGCCGCTTCTAGAGGGTCTCATGTCTATCCCAGAAACTCAAAAAGGTGTTATCTTCTACGAATCCCCAGTTCGAGTTTATCATTATCAATACTGCCATTTCAAAGAATACGTAAATAATTAATAGTAGTGATTTTCCTAACTTTATTTAGTCAAAAAATTAGCCTTTTAATTCTGCTGTAACCCGTACATGCCCAAAATAGGGGGCGGGTTACACAGAATATATAACATCGTAGGTGTCTGGGTGAACAGTTTATTCCTGGCATCCACTAAATATAATGGAGCCCGCTTTTTAAGCTGGCATCCAGAAAAAAAAAGAATCCCAGCACCAAAATATTGTTTTCTTCACCAACCATCAGTTCATAGGTCCATTCTCTTAGCGCAACTACAGAGAACAGGGGCACAAACAGGCAAAAAACGGGCACAACCTCAATGGAGTGATGCAACCTGCCTGGAGTAAATGATGACACAAGGCAATTGACCCACGCATGTATCTATCTCATTTTCTTACACCTTCTATTACCTTCTGCTCTCTCTGATTTGGAAAAAGCTGAAAAAAAAGGTTGAAACCAGTTCCCTGAAATTATTCCCCTACTTGACTAATAAGTATATAAAGACGGTAGGTATTGATTGTAATTCTGTAAATCTATTTCTTAAACTTCTTAAATTCTACTTTTATAGTTAGTCTTTTTTTTAGTTTTAAAACACCAAGAACTTAGTTTCGAATAAACACACATAAACAAACAAAGGATCCATTGAATTGAATTGAAATCGATAGATCAATTTTTTTCTTTTCTCTTTCCCCATCCTTTACGCTAAAATAATAGTTTATTTTATTTTTTGAATATTTTTTATTTATATACGTATATATAGACTATTATTTATCTTTTAATGATTATTAAGATTTTTATTAAAAAAAAATTCGCTCCTCTTTTAATGCCTTTATGCAGTTTTTTTTTCCCATTCGATATTTCTATGTAGGCCTTACTAGTAGCGGCCGCTGCA

We insert promoter TEF1 and terminator CYC1, promoter GPM1 and terminator TDH1, promoter TDH3 and terminator PGK1, promoter TEF2 and terminator ENO2 into vector pSB1C3 using restriction endonuclease and T4 DNA ligase, respectively.

The pSB1C3 digestion system we used:

pSB1C3	15 μL
EcoRI	3 μL
PstI	3 μL
Cutsmart Buffer	5 μL
ddH₂O	24 μL

The enzyme system we use:

pSB1C3	2 μL
fragment	6 μL
T4 DNA Ligase	0.5 μL
T4 Buffer	1 μL
ddH2O	0.5 μL

BBa_k3126001:

BBa_k3126002:

BBa_k3126003:

BBa_k3126004:

2019.6.10 ~ 6.20

Construction plasmids：

GTCCGGCAAAAAAGGGCAAGGTGTCACCACCCTGCCCTTTTTCTTTAAAACCGAAAAGATTACTTCGCGTTATGCAGGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCACAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGCTCGAGGCTTGGATTCTCACCAATAAAAAACGCCCGGCGGCAACCGAGCGTTCTGAACAAATCCAGATGGAGTTCTGAGGTCATTACTGGATCTATCAACAGGAGTCCAAGCGAGCTCGATATCAAATTACGCCCCGCCCTGCCACTCATCGCAGTACTGTTGTAATTCATTAAGCATTCTGCCGACATGGAAGCCATCACAAACGGCATGATGAACCTGAATCGCCAGCGGCATCAGCACCTTGTCGCCTTGCGTATAATATTTGCCCATGGTGAAAACGGGGGCGAAGAAGTTGTCCATATTGGCCACGTTTAAATCAAAACTGGTGAAACTCACCCAGGGATTGGCTGAGACGAAAAACATATTCTCAATAAACCCTTTAGGGAAATAGGCCAGGTTTTCACCGTAACACGCCACATCTTGCGAATATATGTGTAGAAACTGCCGGAAATCGTCGTGGTATTCACTCCAGAGCGATGAAAACGTTTCAGTTTGCTCATGGAAAACGGTGTAACAAGGGTGAACACTATCCCATATCACCAGCTCACCGTCTTTCATTGCCATACGAAATTCCGGATGAGCATTCATCAGGCGGGCAAGAATGTGAATAAAGGCCGGATAAAACTTGTGCTTATTTTTCTTTACGGTCTTTAAAAAGGCCGTAATATCCAGCTGAACGGTCTGGTTATAGGTACATTGAGCAACTGACTGAAATGCCTCAAAATGTTCTTTACGATGCCATTGGGATATATCAACGGTGGTATATCCAGTGATTTTTTTCTCCATTTTAGCTTCCTTAGCTCCTGAAAATCTCGATAACTCAAAAAATACGCCCGGTAGTGATCTTATTTCATTATGGTGAAAGTTGGAACCTCTTACGTGCCCGATCAACTCGAGTGCCACCTGACGTCTAAGAAACCATTATTATCATGACATTAACCTATAAAAATAGGCGTATCACGAGGCAGAATTTCAGATAAAAAAAATCCTTAGCTTTCGCTAAGGATGATTTCTGGAATTCGCGGCCGCTTCTAGAGGGTCTCATGTCTATCCCAGAAACTCAAAAAGGTGTTATCTTCTACGAATCCCCCTTGCCAACAGGGAGTTCTTCAGAGACATGGAGGCTCAAAACGAAATTATTGACAGCCTAGACATCAATAGTCATACAACAGAAAGCGACCACCCAACTTTGGCTGATAATAGCGTATAAACAATGCATACTTTGTACGTTCAAAATACAATGCAGTAGATATATTTATGCATATTACATATAATACATATCACATAGGAAGCAACAGGCGCGTTGGACTTTTAATTTTCGAGGACCGCGAATCCTTACATCACACCCAATCCCCCACAAGTGATCCCCCACACACCATAGCTTCAAAATGTTTCTACTCCTTTTTTACTCTTCCAGATTTTCTCGGACTCCGCGCATCGCCGTACCACTTCAAAACACCCAAGCACAGCATACTAAATTTCCCCTCTTTCTTCCTCTAGGGTGTCGTTAATTACCCGTACTAAAGGTTTGGAAAAGAAAAAAGACACCGCCTCGTTTCTTTTTCTTCGTCGAAAAAGGCAATAAAAATTTTTATCACGTTTCTTTTTCTTGAAAATTTTTTTTTTTGATTTTTTTCTCTTTCGATGACCTCCCATTGATATTTAAGTTAATAAACGGTCATCAATTTCTCAAGTTTCAGTTTCATTTTTCTTGTTCTATTACAACTTTTTTTACTTCTTGCTCATTAGAAAGAAAGCATAGCAATCTAATCTAAGTTTTAATTACAAAGGATCCATGAGATTCCCTAGTATCTTCACCGCCGTCTTGTTCGCTGCTAGTTCTGCTTTGGCTGCTCCAGTCAACACTACCACCGAAGACGAAACCGCTCAGATCCCAGCTGAAGCCGTCATCGGTTACCTTGACCTTGAGGGTGACTTCGATGTCGCCGTCCTTCCATTCTCTAACAGTACCAACAACGGTCTTTTGTTCATTAACACCACCATTGCTTCTATCGCCGCTAAGGAGGAGGGTGTCTCTCTTGACAAGAGACATCACCACCACCATCACAGTGCTAAGTCTAGTTTCATCTCTACCACCACTACCGACCTTACCTCTATCAACACCAGTGCCTACAGTACCGGTTCTATCTCTACCGTCGAAACCGGAAACAGAACCACCTCTGAGGTCATCTCTCATGTCGTCACCACCTCTACCAAGCTTAGTCCTACCGCCACCACCAGTCTTACCATCGCTCAAACTTCTATTTATAGTACCGACTCTAATATTACCGTCGGTACCGACATCCACACCACCAGTGAAGTCATCTCTGACGTCGAAACCATCTCTAGGGAAACCGCCTCTACCGTTGTTGCCGCCCCAACTTCTACCACTGGTTGGACCGGTGCCATGAACACTTACATCTCTCAATTCACTTCTTCTAGTTTTGCTACTATTAACTCTACCCCTATCATCTCTTCTAGTGCCGTCTTCGAAACCAGTGACGCCTCTATCGTCAACGTCCATACCGAGAACATCACCAACACTGCTGCCGTTCCATCTGAGGAGCCTACCTTCGTCAACGCCACTAGAAACTCTCTTAATTCTTTTTGTTCTTCTAAACAACCATCTTCTCCTAGTTCTTATACTTCTTCTCCTTTGGTTTCTTCTTTGTCTGTTTCTAAGACCTTGTTGTCTACCTCTTTCACCCCTTCTGTCCCAACTTCTAATACTTATATTAAGACCAAGAACACTGGTTACTTCGAGCACACTGCCTTGACCACCTCTAGTGTTGGATTGAATAGTTTCTCTGAAACCGCCGTCTCTAGTCAAGGTACCAAGATTGACACCTTTTTGGTTTCTAGTTTGATCGCCTACCCATCTTCTGCCTCTGGTTCTCAGCTTAGTGGTATCCAGCAAAATTTTACCTCTACTTCTTTGATGATCAGTACCTACGAGGGTAAGGCCAGTATCTTCTTCTCTGCCGAGTTGGGTTCTATTATTTTTTTGTTGCTTAGTTATTTGTTGTTTTAAAACGGGTACTGTACAGTTAGTACATTGAGTCGAAATATACGAAATTATTGTTCATAATTTTCATCCTGGCTCTTTTTTTCTTCAACCATAGTTAAATGGACAGTTCATATCTTAACTCTAATAATACTTTTCTAGTTCTTATCCTTTTCCGTCTCACCGCAGATTTTATCATAGTATTAAATTTATATTTTGTTCGTAAAAAGAAAAATTTGTGAGCGTTACCGCTCGTTTCATTACCCGAAGGCTGTTTCAGTAGACCACTGATTAAGTAAGTAGATGAAAAAATTTCATCACCATGAAAGAGTTCGATGAGAGCTACTTTTTCAAATGCTTAACAGCTAACCGCCATTCAATAATGTTACGCTCTCTTCATTCTGCGGCTACGTTATCTAACAAGAGGTTTTACTCTCTCATATCTCATTCAAATAGAAAGAACATAATCAAAAGGATCCTCATGTAATTAGTTATGTCACGCTTACATTCACGCCCTCCCCCCACATCCGCTCTAACCGAAAAGGAAGGAGTTAGACAACCTGAAGTCTAGGTCCCTATTTATTTTTTTATAGTTATGTTAGTATTAAGAACGTTATTTATATTTCAAATTTTTCTTTTTTTTCTGTACAGACGCGTGTACGCATGTAACATTATACTGAAAACCTTGCTTGAGAAGGTTTTGGGACGCTCGAAGGCTTTAATTTGCAGGCCTTACTAGTAGCGGCCGCTGCA

GTCCGGCAAAAAAGGGCAAGGTGTCACCACCCTGCCCTTTTTCTTTAAAACCGAAAAGATTACTTCGCGTTATGCAGGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCACAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGCTCGAGGCTTGGATTCTCACCAATAAAAAACGCCCGGCGGCAACCGAGCGTTCTGAACAAATCCAGATGGAGTTCTGAGGTCATTACTGGATCTATCAACAGGAGTCCAAGCGAGCTCGATATCAAATTACGCCCCGCCCTGCCACTCATCGCAGTACTGTTGTAATTCATTAAGCATTCTGCCGACATGGAAGCCATCACAAACGGCATGATGAACCTGAATCGCCAGCGGCATCAGCACCTTGTCGCCTTGCGTATAATATTTGCCCATGGTGAAAACGGGGGCGAAGAAGTTGTCCATATTGGCCACGTTTAAATCAAAACTGGTGAAACTCACCCAGGGATTGGCTGAGACGAAAAACATATTCTCAATAAACCCTTTAGGGAAATAGGCCAGGTTTTCACCGTAACACGCCACATCTTGCGAATATATGTGTAGAAACTGCCGGAAATCGTCGTGGTATTCACTCCAGAGCGATGAAAACGTTTCAGTTTGCTCATGGAAAACGGTGTAACAAGGGTGAACACTATCCCATATCACCAGCTCACCGTCTTTCATTGCCATACGAAATTCCGGATGAGCATTCATCAGGCGGGCAAGAATGTGAATAAAGGCCGGATAAAACTTGTGCTTATTTTTCTTTACGGTCTTTAAAAAGGCCGTAATATCCAGCTGAACGGTCTGGTTATAGGTACATTGAGCAACTGACTGAAATGCCTCAAAATGTTCTTTACGATGCCATTGGGATATATCAACGGTGGTATATCCAGTGATTTTTTTCTCCATTTTAGCTTCCTTAGCTCCTGAAAATCTCGATAACTCAAAAAATACGCCCGGTAGTGATCTTATTTCATTATGGTGAAAGTTGGAACCTCTTACGTGCCCGATCAACTCGAGTGCCACCTGACGTCTAAGAAACCATTATTATCATGACATTAACCTATAAAAATAGGCGTATCACGAGGCAGAATTTCAGATAAAAAAAATCCTTAGCTTTCGCTAAGGATGATTTCTGGAATTCGCGGCCGCTTCTAGAGGGTCTCATGTCTATCCCAGAAACTCAAAAAGGTGTTATCTTCTACGAATCCCGCCAAACTTTTCGGTTAACACATGCAGTGATGCACGCGCGATGGTGCTAAGTTACATATATATATATATATATATATATATATATATATAGCCATAGTGATGTCTAAGTAACCTTTATGGTATATTTCTTAATGTGGAAAGATACTAGCGCGCGCACCCACACACAAGCTTCGTCTTTTCTTGAAGAAAAGAGGAAGCTCGCTAAATGGGATTCCACTTTCCGTTCCCTGCCAGCTGATGGAAAAAGGTTAGTGGAACGATGAAGAATAAAAAGAGAGATCCACTGAGGTGAAATTTCAGCTGACAGCGAGTTTCATGATCGTGATGAACAATGGTAACGAGTTGTGGCTGTTGCCAGGGAGGGTGGTTCTCAACTTTTAATGTATGGCCAAATCGCTACTTGGGTTTGTTATATAACAAAGAAGAAATAATGAACTGATTCTCTTCCTCCTTCTTGTCCTTTCTTAATTCTGTTGTAATTACCTTCCTTTGTAATTTTTTTTGTAATTATTCTTCTTAATAATCCAAACAAACACACATATTACAATAGGATCCATGATTAAGTACCATGTCATGAAAGAAGGTTACATCTTGACTGTTTTTAAAAATGAAAGGTTGAGTTGGTTGCCATATATCGCCATCGTCATTTTGTTGCACGTTATTGGTTTCTCTTTCTTGTGGATCGCCGGTAAGGACCATCACATTTTGTTCGGTATGGGTATCCTTGCCTACACTCTTGGTTTGAGGCATGCCTTTGATGCCGACCATATCGCCGCTATCGACAACACCGTTAGAAAGTTGTTGCAGCAGAGAAAGGACCCATCTGGTGTCGGTTTCTACTTCTCTATTGGACATTCTTCTGTCGTCTTCTTGATGGCCGTTTTCCTTGGTGTCTCTGTCAAGTGGGCCAAGGACGAACTTCCTCACTTCCAAGATATCGGAGGTACCATTGGAACCCTTGTTTCTGGTTTTTTCTTGGTTCTTATTGGAGTTCTTAATCTTATTATTCTTATTTCTTTGATTAACTTGTTCGCCAAGTTGAGGAGGGAACACATCGAAGAAGCTGAGGTCGATGCCTTGTTGGAGTCTAGGGGTCTTGTCTCTAGGTTCGTCGGACCATACTTTAAGTTGATCACCAGAAGTTGGCACGTCTTGCCTCTTGGATTCCTTTTCGGATTGGGATTCGACACCGCTTCTGAGATCGCCTTGCTTGCCCTTAGTAGTGGAGCCTCTCAGCAAGCTATCTCTTTCATTGGTATTTTGTCTTTGCCTATCTTGTTCGCCAGTGGTATGAGTCTTCTTGACACCCTTGACGGTGTCGTCATGAAGTACGCCTACAACTGGGCCTTCTTCAACCCTATCAGAAAAATCTATTACAACATTACCATTACCGCCATCTCTGTTATGGCCGCCCTTGTTATCGGTATGATCGAATTGCTTCAAATTCTTGCCGACAAACTTGACTTGCATGGAGCCTTCTGGGCCTTCATTGGAAGTATCGAGTTCGATTATTTGGGTTATATCTTGGTTGCCTTGTTTCTTATTACTTGGTTGATCAGTTCTTTGATTTGGAAATTTGGAAGAATTGAACACAAATGGAGTAGATAAGGATCCATAAAGCAATCTTGATGAGGATAATGATTTTTTTTTGAATATACATAAATACTACCGTTTTTCTGCTAGATTTTGTGATGACGTAAATAAGTACATATTACTTTTTAAGCCAAGACAAGATTAAGCATTAACTTTACCCTTTTCTTTCTAAGTTTCAATATTAGTTATCACTGTTTAAAAGTTATGGCGAGAACGTCGGCGGTTAAAATATATTACCCTGAACGAGGCCTTACTAGTAGCGGCCGCTGCA

GTCCGGCAAAAAAGGGCAAGGTGTCACCACCCTGCCCTTTTTCTTTAAAACCGAAAAGATTACTTCGCGTTATGCAGGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCACAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGCTCGAGGCTTGGATTCTCACCAATAAAAAACGCCCGGCGGCAACCGAGCGTTCTGAACAAATCCAGATGGAGTTCTGAGGTCATTACTGGATCTATCAACAGGAGTCCAAGCGAGCTCGATATCAAATTACGCCCCGCCCTGCCACTCATCGCAGTACTGTTGTAATTCATTAAGCATTCTGCCGACATGGAAGCCATCACAAACGGCATGATGAACCTGAATCGCCAGCGGCATCAGCACCTTGTCGCCTTGCGTATAATATTTGCCCATGGTGAAAACGGGGGCGAAGAAGTTGTCCATATTGGCCACGTTTAAATCAAAACTGGTGAAACTCACCCAGGGATTGGCTGAGACGAAAAACATATTCTCAATAAACCCTTTAGGGAAATAGGCCAGGTTTTCACCGTAACACGCCACATCTTGCGAATATATGTGTAGAAACTGCCGGAAATCGTCGTGGTATTCACTCCAGAGCGATGAAAACGTTTCAGTTTGCTCATGGAAAACGGTGTAACAAGGGTGAACACTATCCCATATCACCAGCTCACCGTCTTTCATTGCCATACGAAATTCCGGATGAGCATTCATCAGGCGGGCAAGAATGTGAATAAAGGCCGGATAAAACTTGTGCTTATTTTTCTTTACGGTCTTTAAAAAGGCCGTAATATCCAGCTGAACGGTCTGGTTATAGGTACATTGAGCAACTGACTGAAATGCCTCAAAATGTTCTTTACGATGCCATTGGGATATATCAACGGTGGTATATCCAGTGATTTTTTTCTCCATTTTAGCTTCCTTAGCTCCTGAAAATCTCGATAACTCAAAAAATACGCCCGGTAGTGATCTTATTTCATTATGGTGAAAGTTGGAACCTCTTACGTGCCCGATCAACTCGAGTGCCACCTGACGTCTAAGAAACCATTATTATCATGACATTAACCTATAAAAATAGGCGTATCACGAGGCAGAATTTCAGATAAAAAAAATCCTTAGCTTTCGCTAAGGATGATTTCTGGAATTCGCGGCCGCTTCTAGAGGGTCTCATGTCTATCCCAGAAACTCAAAAAGGTGTTATCTTCTACGAATCCCCAGTTCGAGTTTATCATTATCAATACTGCCATTTCAAAGAATACGTAAATAATTAATAGTAGTGATTTTCCTAACTTTATTTAGTCAAAAAATTAGCCTTTTAATTCTGCTGTAACCCGTACATGCCCAAAATAGGGGGCGGGTTACACAGAATATATAACATCGTAGGTGTCTGGGTGAACAGTTTATTCCTGGCATCCACTAAATATAATGGAGCCCGCTTTTTAAGCTGGCATCCAGAAAAAAAAAGAATCCCAGCACCAAAATATTGTTTTCTTCACCAACCATCAGTTCATAGGTCCATTCTCTTAGCGCAACTACAGAGAACAGGGGCACAAACAGGCAAAAAACGGGCACAACCTCAATGGAGTGATGCAACCTGCCTGGAGTAAATGATGACACAAGGCAATTGACCCACGCATGTATCTATCTCATTTTCTTACACCTTCTATTACCTTCTGCTCTCTCTGATTTGGAAAAAGCTGAAAAAAAAGGTTGAAACCAGTTCCCTGAAATTATTCCCCTACTTGACTAATAAGTATATAAAGACGGTAGGTATTGATTGTAATTCTGTAAATCTATTTCTTAAACTTCTTAAATTCTACTTTTATAGTTAGTCTTTTTTTTAGTTTTAAAACACCAAGAACTTAGTTTCGAATAAACACACATAAACAAACAAAGGATCCATGGAGAGTTCTTCTCATATTATTGAAGTCAACGGAGGTAGATCTGACGAGGAAAGAAGGGCTGTCGCTAGTAAGGTCTGCGGAGAAGCTCCTTGCGGTTTCAGTGACGCTAAGAACGCTTCTGGTGACGCCCAAGAAAGGAACGCCTCTATGAGGAAATTGTGCATCGCCGTCGTCTTGTGCCTTGTCTTCATGTCTGTCGAGGTCGTTGGTGGTGTCAAGGCCAACAGTTTGGCCATCATGACCGATGCCGCTCATCTTTTGAGTGACGTTGCCGCTTTCGCCATCTCTTTGTTCAGTCTTTGGGCTGCCGGTTGGGAGGCTACCCCAAGGCACACCTACGGATTCTTCAGAATCGAAATTCTTGGAGCTCTTGTTTCTATCCAATTGATTTGGTTGCTTACTGGTATCCTTGTTTACGAGGCCATCATTAGACTTTTGACCGAAACCTCTGAGGTCAACGGTTTCTTGATGTTCGCTGTCGCCACTTTCGGTTTGCTTGTCAACATTATCATGGCTGTCATGCTTGGTCACGACCATGACAATGGTCACGGTCATAGTCACGGTGAGGACAAACACGATGAAGCCCATGGTGACGTCACTGAACAGCTTCTTGAAAAGCCAAAACAGCAGAAGGAAAAAAAGAAGAGGAACATCAACGCCCAAGGTGCCTATTTGCACGTCTTGGGTGACTCTATCCAGTCTGTCGGAGTCATGATCGGTGGTGCTGCTATCTGGTACAATCCAAAGTGGAAGATCATTGACTTGATCTGCACCTTGGTCTTCTCTGTCATCGTCTTGGGAACCACCATCAATATGATCAGAAGTATTCTTGAGGTCTTGATGGAGAGTACCCCAAGAGAAATCGACGCCACCAAGCTTGAGAAGGGTCTTCTTGAGATGGAGGAGGTCGTCGCTGTTCACGAATTGCACATCTGGGCCTCTACCGTTGGTAAGGTCTTGCTTGCTTGCCATGTCAACGCCAGACCAGATGCCGATGCCGATATGGTCCTTAACAAAGTCGTTGACTATATTAGGAGAGAATATAACATTTCTCATGTTACTATCCAAATTGAAAGATAAGGATCCATTGAATTGAATTGAAATCGATAGATCAATTTTTTTCTTTTCTCTTTCCCCATCCTTTACGCTAAAATAATAGTTTATTTTATTTTTTGAATATTTTTTATTTATATACGTATATATAGACTATTATTTATCTTTTAATGATTATTAAGATTTTTATTAAAAAAAAATTCGCTCCTCTTTTAATGCCTTTATGCAGTTTTTTTTTCCCATTCGATATTTCTATGTAGGCCTTACTAGTAGCGGCCGCTGCA

GTCCGGCAAAAAAGGGCAAGGTGTCACCACCCTGCCCTTTTTCTTTAAAACCGAAAAGATTACTTCGCGTTATGCAGGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCACAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGCTCGAGGCTTGGATTCTCACCAATAAAAAACGCCCGGCGGCAACCGAGCGTTCTGAACAAATCCAGATGGAGTTCTGAGGTCATTACTGGATCTATCAACAGGAGTCCAAGCGAGCTCGATATCAAATTACGCCCCGCCCTGCCACTCATCGCAGTACTGTTGTAATTCATTAAGCATTCTGCCGACATGGAAGCCATCACAAACGGCATGATGAACCTGAATCGCCAGCGGCATCAGCACCTTGTCGCCTTGCGTATAATATTTGCCCATGGTGAAAACGGGGGCGAAGAAGTTGTCCATATTGGCCACGTTTAAATCAAAACTGGTGAAACTCACCCAGGGATTGGCTGAGACGAAAAACATATTCTCAATAAACCCTTTAGGGAAATAGGCCAGGTTTTCACCGTAACACGCCACATCTTGCGAATATATGTGTAGAAACTGCCGGAAATCGTCGTGGTATTCACTCCAGAGCGATGAAAACGTTTCAGTTTGCTCATGGAAAACGGTGTAACAAGGGTGAACACTATCCCATATCACCAGCTCACCGTCTTTCATTGCCATACGAAATTCCGGATGAGCATTCATCAGGCGGGCAAGAATGTGAATAAAGGCCGGATAAAACTTGTGCTTATTTTTCTTTACGGTCTTTAAAAAGGCCGTAATATCCAGCTGAACGGTCTGGTTATAGGTACATTGAGCAACTGACTGAAATGCCTCAAAATGTTCTTTACGATGCCATTGGGATATATCAACGGTGGTATATCCAGTGATTTTTTTCTCCATTTTAGCTTCCTTAGCTCCTGAAAATCTCGATAACTCAAAAAATACGCCCGGTAGTGATCTTATTTCATTATGGTGAAAGTTGGAACCTCTTACGTGCCCGATCAACTCGAGTGCCACCTGACGTCTAAGAAACCATTATTATCATGACATTAACCTATAAAAATAGGCGTATCACGAGGCAGAATTTCAGATAAAAAAAATCCTTAGCTTTCGCTAAGGATGATTTCTGGAATTCGCGGCCGCTTCTAGAGTTGATAGGTCAAGATCAATGTAAACAATTACTTTGTTATGTAGAGTTTTTTTAGCTACCTATATTCCACCATAACATCAATCATGCGGTTGCTGGTGTATTTACCAATAATGTTTAATGTATATATATATATATATATATGGGGCCGTATACTTACATATAGTAGATGTCAAGCGTAGGCGCTTCCCCTGCCGGCTGTGAGGGCGCCATAACCAAGGTATCTATAGACCGCCAATCAGCAAACTACCTCCGTACATTCATGTTGCACCCACACATTTATACACCCAGACCGCGACAAATTACCCATAAGGTTGTTTGTGACGGCGTCGTACAAGAGAACGTGGGAACTTTTTAGGCTCACCAAAAAAGAAAGAAAAAATACGAGTTGCTGACAGAAGCCTCAAGAAAAAAAAAATTCTTCTTCGACTATGCTGGAGGCAGAGATGATCGAGCCGGTAGTTAACTATATATAGCTAAATTGGTTCCATCACCTTCTTTTCTGGTGTCGCTCCTTCTAGTGCTATTTCTGGCTTTTCCTATTTTTTTTTTTCCATTTTTCTTTCTCTCTTTCTAATATATAAATTCTCTTGCATTTTCTATTTTTCTCTCTATCTATTCTACTTGTTTATTCCCTTCAAGGTTTTTTTTTAAGGAGTACTTGTTTTTAGAATATACGGTCAACGAACTATAATTAACTAAACGGATCCATGGGAAAGGAGAAGACCCACGTCAGTAGACCAAGGCTTAACAGTAACATGGACGCCGACTTGTACGGATACAAGTGGGCCAGAGACAACGTCGGTCAGTCTGGAGCTACCATCTATAGACTTTACGGAAAGCCAGACGCCCCAGAGTTGTTCCTTAAGCACGGTAAGGGATCTGTTGCCAACGACGTCACCGATGAGATGGTTAGACTTAACTGGCTTACCGAGTTCATGCCACTTCCAACCATCAAGCACTTCATTAGAACCCCAGATGACGCTTGGTTGTTGACCACTGCCATCCCCGGTAAGACCGCCTTTCAAGTTTTGGAAGAGTACCCAGACTCTGGAGAGAACATCGTTGACGCCTTGGCCGTCTTCCTTAGGAGGTTGCACTCTATCCCAGTTTGCAACTGCCCATTCAATAGTGATAGAGTCTTCAGACTTGCCCAAGCCCAGTCTAGGATGAACAACGGATTGGTCGATGCCTCTGACTTCGACGACGAGAGAAATGGATGGCCAGTCGAGCAAGTTTGGAAGGAGATGCATAAGCTTTTGCCTTTTTCTCCAGACAGTGTTGTCACCCACGGTGACTTTAGTTTGGACAACCTTATTTTCGACGAGGGTAAATTGATCGGTTGCATCGACGTCGGTAGAGTTGGTATCGCCGATAGATACCAAGACTTGGCCATCTTGTGGAACTGCTTGGGTGAGTTCTCTCCAAGTCTTCAAAAAAGATTGTTCCAAAAATATGGTATTGACAACCCAGATATGAATAAATTGCAATTTCATTTGATGTTGGATGAGTTTTTCTAAGGATCCAGTGCTTTTAACTAAGAATTATTAGTCTTTTCTGCTTATTTTTTCATCATAGTTTAGAACACTTTATATTAACGAATAGTTTATGAATCTATTTAGGTTTAAAAATTGATACAGTTTTATAAGTTACTTTTTCAAAGACTCGTGCTGTCTATTGCATAATGCACTGGAAGGGGAAAAAAAAGGTGCACACGCGTGGCTTTTTCTTGAATTTGCAGTTTGAAAAATAAAGGGTCAAATCGTTGGTAGATACGTTGTTGACACTTCTAAATAAGAGACCTACTAGTAGCGGCCGCTGCA

Insertion of gene into plasmid carrying promoter and terminator.

BBa_K3126005 (pSB1C3-pTEF1/ tCYC1/ hexa His):

Enzyme digestion system:

BBa_K3126001	20 μL
BamHI	3 μL
buffer	5 μL
ddH₂O	22 μL

Seamless cloning system:

BBa_K3126001	2 μL
hexa-His	4 μL
5×CEⅡ Buffer	2 μL
Exnase Ⅱ	1 μL
ddH₂O	1 μL

BBa_K3126006 (pSB1C3-pGPM1/tTDH1/ nixA):

Enzyme digestion system:

BBa_K3126002	20 μL
BamHI	3 μL
buffer	5 μL
ddH₂O	22 μL

Seamless cloning system:

BBa_K3126002	2 μL
nixA	4 μL
5×CEⅡ Buffer	2 μL
Exnase Ⅱ	1 μL
ddH₂O	1 μL

BBa_K3126007 (pSB1C3-pTDH3/tPGK1/ TgMTP1t2):

Enzyme digestion system:

BBa_K3126003	20 μL
BamHI	3 μL
buffer	5 μL
ddH₂O	22 μL

Seamless cloning system:

BBa__K3126003	2 μL
TgMTP1t2	4 μL
5×CEⅡ Buffer	2 μL
Exnase Ⅱ	1 μL
ddH₂O	1 μL

BBa_K3126008 (pSB1C3-pTEF2/tENO2/ kanR):

Enzyme digestion system:

BBa_K3126003	20 μL
BamHI	3 μL
buffer	5 μL
ddH₂O	22 μL

Seamless cloning system:

BBa_K3126004	2 μL
kanR	4 μL
5×CEⅡ Buffer	2 μL
Exnase Ⅱ	1 μL
ddH₂O	1 μL

2019.6.20 ~ 6.30

Construction of plasmids for the translation and expression of genes in S. cerevisiae:

GTCCGGCAAAAAAGGGCAAGGTGTCACCACCCTGCCCTTTTTCTTTAAAACCGAAAAGATTACTTCGCGTTATGCAGGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCACAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGCTCGAGGCTTGGATTCTCACCAATAAAAAACGCCCGGCGGCAACCGAGCGTTCTGAACAAATCCAGATGGAGTTCTGAGGTCATTACTGGATCTATCAACAGGAGTCCAAGCGAGCTCGATATCAAATTACGCCCCGCCCTGCCACTCATCGCAGTACTGTTGTAATTCATTAAGCATTCTGCCGACATGGAAGCCATCACAAACGGCATGATGAACCTGAATCGCCAGCGGCATCAGCACCTTGTCGCCTTGCGTATAATATTTGCCCATGGTGAAAACGGGGGCGAAGAAGTTGTCCATATTGGCCACGTTTAAATCAAAACTGGTGAAACTCACCCAGGGATTGGCTGAGACGAAAAACATATTCTCAATAAACCCTTTAGGGAAATAGGCCAGGTTTTCACCGTAACACGCCACATCTTGCGAATATATGTGTAGAAACTGCCGGAAATCGTCGTGGTATTCACTCCAGAGCGATGAAAACGTTTCAGTTTGCTCATGGAAAACGGTGTAACAAGGGTGAACACTATCCCATATCACCAGCTCACCGTCTTTCATTGCCATACGAAATTCCGGATGAGCATTCATCAGGCGGGCAAGAATGTGAATAAAGGCCGGATAAAACTTGTGCTTATTTTTCTTTACGGTCTTTAAAAAGGCCGTAATATCCAGCTGAACGGTCTGGTTATAGGTACATTGAGCAACTGACTGAAATGCCTCAAAATGTTCTTTACGATGCCATTGGGATATATCAACGGTGGTATATCCAGTGATTTTTTTCTCCATTTTAGCTTCCTTAGCTCCTGAAAATCTCGATAACTCAAAAAATACGCCCGGTAGTGATCTTATTTCATTATGGTGAAAGTTGGAACCTCTTACGTGCCCGATCAACTCGAGTGCCACCTGACGTCTAAGAAACCATTATTATCATGACATTAACCTATAAAAATAGGCGTATCACGAGGCAGAATTTCAGATAAAAAAAATCCTTAGCTTTCGCTAAGGATGATTTCTGGAATTCGCGGCCGCTTCTAGAGGGTCTCATGTCTATCCCAGAAACTCAAAAAGGTGTTATCTTCTACGAATCCCCCTTGCCAACAGGGAGTTCTTCAGAGACATGGAGGCTCAAAACGAAATTATTGACAGCCTAGACATCAATAGTCATACAACAGAAAGCGACCACCCAACTTTGGCTGATAATAGCGTATAAACAATGCATACTTTGTACGTTCAAAATACAATGCAGTAGATATATTTATGCATATTACATATAATACATATCACATAGGAAGCAACAGGCGCGTTGGACTTTTAATTTTCGAGGACCGCGAATCCTTACATCACACCCAATCCCCCACAAGTGATCCCCCACACACCATAGCTTCAAAATGTTTCTACTCCTTTTTTACTCTTCCAGATTTTCTCGGACTCCGCGCATCGCCGTACCACTTCAAAACACCCAAGCACAGCATACTAAATTTCCCCTCTTTCTTCCTCTAGGGTGTCGTTAATTACCCGTACTAAAGGTTTGGAAAAGAAAAAAGACACCGCCTCGTTTCTTTTTCTTCGTCGAAAAAGGCAATAAAAATTTTTATCACGTTTCTTTTTCTTGAAAATTTTTTTTTTTGATTTTTTTCTCTTTCGATGACCTCCCATTGATATTTAAGTTAATAAACGGTCATCAATTTCTCAAGTTTCAGTTTCATTTTTCTTGTTCTATTACAACTTTTTTTACTTCTTGCTCATTAGAAAGAAAGCATAGCAATCTAATCTAAGTTTTAATTACAAAGGATCCATGAGATTCCCTAGTATCTTCACCGCCGTCTTGTTCGCTGCTAGTTCTGCTTTGGCTGCTCCAGTCAACACTACCACCGAAGACGAAACCGCTCAGATCCCAGCTGAAGCCGTCATCGGTTACCTTGACCTTGAGGGTGACTTCGATGTCGCCGTCCTTCCATTCTCTAACAGTACCAACAACGGTCTTTTGTTCATTAACACCACCATTGCTTCTATCGCCGCTAAGGAGGAGGGTGTCTCTCTTGACAAGAGACATCACCACCACCATCACAGTGCTAAGTCTAGTTTCATCTCTACCACCACTACCGACCTTACCTCTATCAACACCAGTGCCTACAGTACCGGTTCTATCTCTACCGTCGAAACCGGAAACAGAACCACCTCTGAGGTCATCTCTCATGTCGTCACCACCTCTACCAAGCTTAGTCCTACCGCCACCACCAGTCTTACCATCGCTCAAACTTCTATTTATAGTACCGACTCTAATATTACCGTCGGTACCGACATCCACACCACCAGTGAAGTCATCTCTGACGTCGAAACCATCTCTAGGGAAACCGCCTCTACCGTTGTTGCCGCCCCAACTTCTACCACTGGTTGGACCGGTGCCATGAACACTTACATCTCTCAATTCACTTCTTCTAGTTTTGCTACTATTAACTCTACCCCTATCATCTCTTCTAGTGCCGTCTTCGAAACCAGTGACGCCTCTATCGTCAACGTCCATACCGAGAACATCACCAACACTGCTGCCGTTCCATCTGAGGAGCCTACCTTCGTCAACGCCACTAGAAACTCTCTTAATTCTTTTTGTTCTTCTAAACAACCATCTTCTCCTAGTTCTTATACTTCTTCTCCTTTGGTTTCTTCTTTGTCTGTTTCTAAGACCTTGTTGTCTACCTCTTTCACCCCTTCTGTCCCAACTTCTAATACTTATATTAAGACCAAGAACACTGGTTACTTCGAGCACACTGCCTTGACCACCTCTAGTGTTGGATTGAATAGTTTCTCTGAAACCGCCGTCTCTAGTCAAGGTACCAAGATTGACACCTTTTTGGTTTCTAGTTTGATCGCCTACCCATCTTCTGCCTCTGGTTCTCAGCTTAGTGGTATCCAGCAAAATTTTACCTCTACTTCTTTGATGATCAGTACCTACGAGGGTAAGGCCAGTATCTTCTTCTCTGCCGAGTTGGGTTCTATTATTTTTTTGTTGCTTAGTTATTTGTTGTTTTAAAACGGGTACTGTACAGTTAGTACATTGAGTCGAAATATACGAAATTATTGTTCATAATTTTCATCCTGGCTCTTTTTTTCTTCAACCATAGTTAAATGGACAGTTCATATCTTAACTCTAATAATACTTTTCTAGTTCTTATCCTTTTCCGTCTCACCGCAGATTTTATCATAGTATTAAATTTATATTTTGTTCGTAAAAAGAAAAATTTGTGAGCGTTACCGCTCGTTTCATTACCCGAAGGCTGTTTCAGTAGACCACTGATTAAGTAAGTAGATGAAAAAATTTCATCACCATGAAAGAGTTCGATGAGAGCTACTTTTTCAAATGCTTAACAGCTAACCGCCATTCAATAATGTTACGCTCTCTTCATTCTGCGGCTACGTTATCTAACAAGAGGTTTTACTCTCTCATATCTCATTCAAATAGAAAGAACATAATCAAAAGGATCCTCATGTAATTAGTTATGTCACGCTTACATTCACGCCCTCCCCCCACATCCGCTCTAACCGAAAAGGAAGGAGTTAGACAACCTGAAGTCTAGGTCCCTATTTATTTTTTTATAGTTATGTTAGTATTAAGAACGTTATTTATATTTCAAATTTTTCTTTTTTTTCTGTACAGACGCGTGTACGCATGTAACATTATACTGAAAACCTTGCTTGAGAAGGTTTTGGGACGCTCGAAGGCTTTAATTTGCAGGCCTTACTAGAGTTGATAGGTCAAGATCAATGTAAACAATTACTTTGTTATGTAGAGTTTTTTTAGCTACCTATATTCCACCATAACATCAATCATGCGGTTGCTGGTGTATTTACCAATAATGTTTAATGTATATATATATATATATATATGGGGCCGTATACTTACATATAGTAGATGTCAAGCGTAGGCGCTTCCCCTGCCGGCTGTGAGGGCGCCATAACCAAGGTATCTATAGACCGCCAATCAGCAAA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GTCCGGCAAAAAAGGGCAAGGTGTCACCACCCTGCCCTTTTTCTTTAAAACCGAAAAGATTACTTCGCGTTATGCAGGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCACAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGCTCGAGGCTTGGATTCTCACCAATAAAAAACGCCCGGCGGCAACCGAGCGTTCTGAACAAATCCAGATGGAGTTCTGAGGTCATTACTGGATCTATCAACAGGAGTCCAAGCGAGCTCGATATCAAATTACGCCCCGCCCTGCCACTCATCGCAGTACTGTTGTAATTCATTAAGCATTCTGCCGACATGGAAGCCATCACAAACGGCATGATGAACCTGAATCGCCAGCGGCATCAGCACCTTGTCGCCTTGCGTATAATATTTGCCCATGGTGAAAACGGGGGCGAAGAAGTTGTCCATATTGGCCACGTTTAAATCAAAACTGGTGAAACTCACCCAGGGATTGGCTGAGACGAAAAACATATTCTCAATAAACCCTTTAGGGAAATAGGCCAGGTTTTCACCGTAACACGCCACATCTTGCGAATATATGTGTAGAAACTGCCGGAAATCGTCGTGGTATTCACTCCAGAGCGATGAAAACGTTTCAGTTTGCTCATGGAAAACGGTGTAACAAGGGTGAACACTATCCCATATCACCAGCTCACCGTCTTTCATTGCCATACGAAATTCCGGATGAGCATTCATCAGGCGGGCAAGAATGTGAATAAAGGCCGGATAAAACTTGTGCTTATTTTTCTTTACGGTCTTTAAAAAGGCCGTAATATCCAGCTGAACGGTCTGGTTATAGGTACATTGAGCAACTGACTGAAATGCCTCAAAATGTTCTTTACGATGCCATTGGGATATATCAACGGTGGTATATCCAGTGATTTTTTTCTCCATTTTAGCTTCCTTAGCTCCTGAAAATCTCGATAACTCAAAAAATACGCCCGGTAGTGATCTTATTTCATTATGGTGAAAGTTGGAACCTCTTACGTGCCCGATCAACTCGAGTGCCACCTGACGTCTAAGAAACCATTATTATCATGACATTAACCTATAAAAATAGGCGTATCACGAGGCAGAATTTCAGATAAAAAAAATCCTTAGCTTTCGCTAAGGATGATTTCTGGAATTCGCGGCCGCTTCTAGAGGGTCTCATGTCTATCCCAGAAACTCAAAAAGGTGTTATCTTCTACGAATCCCGCCAAACTTTTCGGTTAACACATGCAGTGATGCACGCGCGATGGTGCTAAGTTACATATATATATATATATATATATATATATATATATAGCCATAGTGATGTCTAAGTAACCTTTATGGTATATTTCTTAATGTGGAAAGATACTAGCGCGCGCACCCACACACAAGCTTCGTCTTTTCTTGAAGAAAAGAGGAAGCTCGCTAAATGGGATTCCACTTTCCGTTCCCTGCCAGCTGATGGAAAAAGGTTAGTGGAACGATGAAGAATAAAAAGAGAGATCCACTGAGGTGAAATTTCAGCTGACAGCGAGTTTCATGATCGTGATGAACAATGGTAACGAGTTGTGGCTGTTGCCAGGGAGGGTGGTTCTCAACTTTTAATGTATGGCCAAATCGCTACTTGGGTTTGTTATATAACAAAGAAGAAATAATGAACTGATTCTCTTCCTCCTTCTTGTCCTTTCTTAATTCTGTTGTAATTACCTTCCTTTGTAATTTTTTTTGTAATTATTCTTCTTAATAATCCAAACAAACACACATATTACAATAGGATCCATGATTAAGTACCATGTCATGAAAGAAGGTTACATCTTGACTGTTTTTAAAAATGAAAGGTTGAGTTGGTTGCCATATATCGCCATCGTCATTTTGTTGCACGTTATTGGTTTCTCTTTCTTGTGGATCGCCGGTAAGGACCATCACATTTTGTTCGGTATGGGTATCCTTGCCTACACTCTTGGTTTGAGGCATGCCTTTGATGCCGACCATATCGCCGCTATCGACAACACCGTTAGAAAGTTGTTGCAGCAGAGAAAGGACCCATCTGGTGTCGGTTTCTACTTCTCTATTGGACATTCTTCTGTCGTCTTCTTGATGGCCGTTTTCCTTGGTGTCTCTGTCAAGTGGGCCAAGGACGAACTTCCTCACTTCCAAGATATCGGAGGTACCATTGGAACCCTTGTTTCTGGTTTTTTCTTGGTTCTTATTGGAGTTCTTAATCTTATTATTCTTATTTCTTTGATTAACTTGTTCGCCAAGTTGAGGAGGGAACACATCGAAGAAGCTGAGGTCGATGCCTTGTTGGAGTCTAGGGGTCTTGTCTCTAGGTTCGTCGGACCATACTTTAAGTTGATCACCAGAAGTTGGCACGTCTTGCCTCTTGGATTCCTTTTCGGATTGGGATTCGACACCGCTTCTGAGATCGCCTTGCTTGCCCTTAGTAGTGGAGCCTCTCAGCAAGCTATCTCTTTCATTGGTATTTTGTCTTTGCCTATCTTGTTCGCCAGTGGTATGAGTCTTCTTGACACCCTTGACGGTGTCGTCATGAAGTACGCCTACAACTGGGCCTTCTTCAACCCTATCAGAAAAATCTATTACAACATTACCATTACCGCCATCTCTGTTATGGCCGCCCTTGTTATCGGTATGATCGAATTGCTTCAAATTCTTGCCGACAAACTTGACTTGCATGGAGCCTTCTGGGCCTTCATTGGAAGTATCGAGTTCGATTATTTGGGTTATATCTTGGTTGCCTTGTTTCTTATTACTTGGTTGATCAGTTCTTTGATTTGGAAATTTGGAAGAATTGAACACAAATGGAGTAGATAAGGATCCATAAAGCAATCTTGATGAGGATAATGATTTTTTTTTGAATATACATAAATACTACCGTTTTTCTGCTAGATTTTGTGATGACGTAAATAAGTACATATTACTTTTTAAGCCAAGACAAGATTAAGCATTAACTTTACCCTTTTCTTTCTAAGTTTCAATATTAGTTATCACTGTTTAAAAGTTATGGCGAGAACGTCGGCGGTTAAAATATATTACCCTGAACGAGGCCTTACTAGAGTTGATAGGTCAAGATCAATGTAAACAATTACTTTGTTATGTAGAGTTTTTTTAGCTACCTATATTCCACCATAACATCAATCATGCGGTTGCTGGTGTATTTACCAATAATGTTTAATGTATATATATATATATATATATGGGGCCGTATACTTACATATAGTAGATGTCAAGCGTAGGCGCTTCCCCTGCCGGCTGTGAGGGCGCCATAACCAAGGTATCTATAGACCGCCAATCAGCAAACTACCTCCGTACATTCATGTTGCACCCACACATTTATACACCCAGACCGCGACAAATTACCCATAAGGTTGTTTGTGACGGCGTCGTACAAGAGAACGTGGGAACTTTTTAGGCTCACCAAAAAAGAAAGAAAAAATACGAGTTGCTGACAGAAGCCTCAAGAAAAAAAAAATTCTTCTTCGACTATGCTGGAGGCAGAGATGATCGAGCCGGTAGTTAACTATATATAGCTAAATTGGTTCCATCACCTTCTTTTCTGGTGTCGCTCCTTCTAGTGCTATTTCTGGCTTTTCCTATTTTTTTTTTTCCATTTTTCTTTCTCTCTTTCTAATATATAAATTCTCTTGCATTTTCTATTTTTCTCTCTATCTATTCTACTTGTTTATTCCCTTCAAGGTTTTTTTTTAAGGAGTACTTGTTTTTAGAATATACGGTCAACGAACTATAATTAACTAAACGGATCCATGGGAAAGGAGAAGACCCACGTCAGTAGACCAAGGCTTAACAGTAACATGGACGCCGACTTGTACGGATACAAGTGGGCCAGAGACAACGTCGGTCAGTCTGGAGCTACCATCTATAGACTTTACGGAAAGCCAGACGCCCCAGAGTTGTTCCTTAAGCACGGTAAGGGATCTGTTGCCAACGACGTCACCGATGAGATGGTTAGACTTAACTGGCTTACCGAGTTCATGCCACTTCCAACCATCAAGCACTTCATTAGAACCCCAGATGACGCTTGGTTGTTGACCACTGCCATCCCCGGTAAGACCGCCTTTCAAGTTTTGGAAGAGTACCCAGACTCTGGAGAGAACATCGTTGACGCCTTGGCCGTCTTCCTTAGGAGGTTGCACTCTATCCCAGTTTGCAACTGCCCATTCAATAGTGATAGAGTCTTCAGACTTGCCCAAGCCCAGTCTAGGATGAACAACGGATTGGTCGATGCCTCTGACTTCGACGACGAGAGAAATGGATGGCCAGTCGAGCAAGTTTGGAAGGAGATGCATAAGCTTTTGCCTTTTTCTCCAGACAGTGTTGTCACCCACGGTGACTTTAGTTTGGACAACCTTATTTTCGACGAGGGTAAATTGATCGGTTGCATCGACGTCGGTAGAGTTGGTATCGCCGATAGATACCAAGACTTGGCCATCTTGTGGAACTGCTTGGGTGAGTTCTCTCCAAGTCTTCAAAAAAGATTGTTCCAAAAATATGGTATTGACAACCCAGATATGAATAAATTGCAATTTCATTTGATGTTGGATGAGTTTTTCTAAGGATCCAGTGCTTTTAACTAAGAATTATTAGTCTTTTCTGCTTATTTTTTCATCATAGTTTAGAACACTTTATATTAACGAATAGTTTATGAATCTATTTAGGTTTAAAAATTGATACAGTTTTATAAGTTACTTTTTCAAAGACTCGTGCTGTCTATTGCATAATGCACTGGAAGGGGAAAAAAAAGGTGCACACGCGTGGCTTTTTCTTGAATTTGCAGTTTGAAAAATAAAGGGTCAAATCGTTGGTAGATACGTTGTTGACACTTCTAAATAAGAGACCTACTAGTAGCGGCCGCTGCA

GTCCGGCAAAAAAGGGCAAGGTGTCACCACCCTGCCCTTTTTCTTTAAAACCGAAAAGATTACTTCGCGTTATGCAGGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCACAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGCTCGAGGCTTGGATTCTCACCAATAAAAAACGCCCGGCGGCAACCGAGCGTTCTGAACAAATCCAGATGGAGTTCTGAGGTCATTACTGGATCTATCAACAGGAGTCCAAGCGAGCTCGATATCAAATTACGCCCCGCCCTGCCACTCATCGCAGTACTGTTGTAATTCATTAAGCATTCTGCCGACATGGAAGCCATCACAAACGGCATGATGAACCTGAATCGCCAGCGGCATCAGCACCTTGTCGCCTTGCGTATAATATTTGCCCATGGTGAAAACGGGGGCGAAGAAGTTGTCCATATTGGCCACGTTTAAATCAAAACTGGTGAAACTCACCCAGGGATTGGCTGAGACGAAAAACATATTCTCAATAAACCCTTTAGGGAAATAGGCCAGGTTTTCACCGTAACACGCCACATCTTGCGAATATATGTGTAGAAACTGCCGGAAATCGTCGTGGTATTCACTCCAGAGCGATGAAAACGTTTCAGTTTGCTCATGGAAAACGGTGTAACAAGGGTGAACACTATCCCATATCACCAGCTCACCGTCTTTCATTGCCATACGAAATTCCGGATGAGCATTCATCAGGCGGGCAAGAATGTGAATAAAGGCCGGATAAAACTTGTGCTTATTTTTCTTTACGGTCTTTAAAAAGGCCGTAATATCCAGCTGAACGGTCTGGTTATAGGTACATTGAGCAACTGACTGAAATGCCTCAAAATGTTCTTTACGATGCCATTGGGATATATCAACGGTGGTATATCCAGTGATTTTTTTCTCCATTTTAGCTTCCTTAGCTCCTGAAAATCTCGATAACTCAAAAAATACGCCCGGTAGTGATCTTATTTCATTATGGTGAAAGTTGGAACCTCTTACGTGCCCGATCAACTCGAGTGCCACCTGACGTCTAAGAAACCATTATTATCATGACATTAACCTATAAAAATAGGCGTATCACGAGGCAGAATTTCAGATAAAAAAAATCCTTAGCTTTCGCTAAGGATGATTTCTGGAATTCGCGGCCGCTTCTAGAGGGTCTCATGTCTATCCCAGAAACTCAAAAAGGTGTTATCTTCTACGAATCCCCAGTTCGAGTTTATCATTATCAATACTGCCATTTCAAAGAATACGTAAATAATTAATAGTAGTGATTTTCCTAACTTTATTTAGTCAAAAAATTAGCCTTTTAATTCTGCTGTAACCCGTACATGCCCAAAATAGGGGGCGGGTTACACAGAATATATAACATCGTAGGTGTCTGGGTGAACAGTTTATTCCTGGCATCCACTAAATATAATGGAGCCCGCTTTTTAAGCTGGCATCCAGAAAAAAAAAGAATCCCAGCACCAAAATATTGTTTTCTTCACCAACCATCAGTTCATAGGTCCATTCTCTTAGCGCAACTACAGAGAACAGGGGCACAAACAGGCAAAAAACGGGCACAACCTCAATGGAGTGATGCAACCTGCCTGGAGTAAATGATGACACAAGGCAATTGACCCACGCATGTATCTATCTCATTTTCTTACACCTTCTATTACCTTCTGCTCTCTCTGATTTGGAAAAAGCTGAAAAAAAAGGTTGAAACCAGTTCCCTGAAATTATTCCCCTACTTGACTAATAAGTATATAAAGACGGTAGGTATTGATTGTAATTCTGTAAATCTATTTCTTAAACTTCTTAAATTCTACTTTTATAGTTAGTCTTTTTTTTAGTTTTAAAACACCAAGAACTTAGTTTCGAATAAACACACATAAACAAACAAAGGATCCATGGAGAGTTCTTCTCATATTATTGAAGTCAACGGAGGTAGATCTGACGAGGAAAGAAGGGCTGTCGCTAGTAAGGTCTGCGGAGAAGCTCCTTGCGGTTTCAGTGACGCTAAGAACGCTTCTGGTGACGCCCAAGAAAGGAACGCCTCTATGAGGAAATTGTGCATCGCCGTCGTCTTGTGCCTTGTCTTCATGTCTGTCGAGGTCGTTGGTGGTGTCAAGGCCAACAGTTTGGCCATCATGACCGATGCCGCTCATCTTTTGAGTGACGTTGCCGCTTTCGCCATCTCTTTGTTCAGTCTTTGGGCTGCCGGTTGGGAGGCTACCCCAAGGCACACCTACGGATTCTTCAGAATCGAAATTCTTGGAGCTCTTGTTTCTATCCAATTGATTTGGTTGCTTACTGGTATCCTTGTTTACGAGGCCATCATTAGACTTTTGACCGAAACCTCTGAGGTCAACGGTTTCTTGATGTTCGCTGTCGCCACTTTCGGTTTGCTTGTCAACATTATCATGGCTGTCATGCTTGGTCACGACCATGACAATGGTCACGGTCATAGTCACGGTGAGGACAAACACGATGAAGCCCATGGTGACGTCACTGAACAGCTTCTTGAAAAGCCAAAACAGCAGAAGGAAAAAAAGAAGAGGAACATCAACGCCCAAGGTGCCTATTTGCACGTCTTGGGTGACTCTATCCAGTCTGTCGGAGTCATGATCGGTGGTGCTGCTATCTGGTACAATCCAAAGTGGAAGATCATTGACTTGATCTGCACCTTGGTCTTCTCTGTCATCGTCTTGGGAACCACCATCAATATGATCAGAAGTATTCTTGAGGTCTTGATGGAGAGTACCCCAAGAGAAATCGACGCCACCAAGCTTGAGAAGGGTCTTCTTGAGATGGAGGAGGTCGTCGCTGTTCACGAATTGCACATCTGGGCCTCTACCGTTGGTAAGGTCTTGCTTGCTTGCCATGTCAACGCCAGACCAGATGCCGATGCCGATATGGTCCTTAACAAAGTCGTTGACTATATTAGGAGAGAATATAACATTTCTCATGTTACTATCCAAATTGAAAGATAAGGATCCATTGAATTGAATTGAAATCGATAGATCAATTTTTTTCTTTTCTCTTTCCCCATCCTTTACGCTAAAATAATAGTTTATTTTATTTTTTGAATATTTTTTATTTATATACGTATATATAGACTATTATTTATCTTTTAATGATTATTAAGATTTTTATTAAAAAAAAATTCGCTCCTCTTTTAATGCCTTTATGCAGTTTTTTTTTCCCATTCGATATTTCTATGTAGGCCTTACTAGAGTTGATAGGTCAAGATCAATGTAAACAATTACTTTGTTATGTAGAGTTTTTTTAGCTACCTATATTCCACCATAACATCAATCATGCGGTTGCTGGTGTATTTACCAATAATGTTTAATGTATATATATATATATATATATGGGGCCGTATACTTACATATAGTAGATGTCAAGCGTAGGCGCTTCCCCTGCCGGCTGTGAGGGCGCCATAACCAAGGTATCTATAGACCGCCAATCAGCAAACTACCTCCGTACATTCATGTTGCACCCACACATTTATACACCCAGACCGCGACAAATTACCCATAAGGTTGTTTGTGACGGCGTCGTACAAGAGAACGTGGGAACTTTTTAGGCTCACCAAAAAAGAAAGAAAAAATACGAGTTGCTGACAGAAGCCTCAAGAAAAAAAAAATTCTTCTTCGACTATGCTGGAGGCAGAGATGATCGAGCCGGTAGTTAACTATATATAGCTAAATTGGTTCCATCACCTTCTTTTCTGGTGTCGCTCCTTCTAGTGCTATTTCTGGCTTTTCCTATTTTTTTTTTTCCATTTTTCTTTCTCTCTTTCTAATATATAAATTCTCTTGCATTTTCTATTTTTCTCTCTATCTATTCTACTTGTTTATTCCCTTCAAGGTTTTTTTTTAAGGAGTACTTGTTTTTAGAATATACGGTCAACGAACTATAATTAACTAAACGGATCCATGGGAAAGGAGAAGACCCACGTCAGTAGACCAAGGCTTAACAGTAACATGGACGCCGACTTGTACGGATACAAGTGGGCCAGAGACAACGTCGGTCAGTCTGGAGCTACCATCTATAGACTTTACGGAAAGCCAGACGCCCCAGAGTTGTTCCTTAAGCACGGTAAGGGATCTGTTGCCAACGACGTCACCGATGAGATGGTTAGACTTAACTGGCTTACCGAGTTCATGCCACTTCCAACCATCAAGCACTTCATTAGAACCCCAGATGACGCTTGGTTGTTGACCACTGCCATCCCCGGTAAGACCGCCTTTCAAGTTTTGGAAGAGTACCCAGACTCTGGAGAGAACATCGTTGACGCCTTGGCCGTCTTCCTTAGGAGGTTGCACTCTATCCCAGTTTGCAACTGCCCATTCAATAGTGATAGAGTCTTCAGACTTGCCCAAGCCCAGTCTAGGATGAACAACGGATTGGTCGATGCCTCTGACTTCGACGACGAGAGAAATGGATGGCCAGTCGAGCAAGTTTGGAAGGAGATGCATAAGCTTTTGCCTTTTTCTCCAGACAGTGTTGTCACCCACGGTGACTTTAGTTTGGACAACCTTATTTTCGACGAGGGTAAATTGATCGGTTGCATCGACGTCGGTAGAGTTGGTATCGCCGATAGATACCAAGACTTGGCCATCTTGTGGAACTGCTTGGGTGAGTTCTCTCCAAGTCTTCAAAAAAGATTGTTCCAAAAATATGGTATTGACAACCCAGATATGAATAAATTGCAATTTCATTTGATGTTGGATGAGTTTTTCTAAGGATCCAGTGCTTTTAACTAAGAATTATTAGTCTTTTCTGCTTATTTTTTCATCATAGTTTAGAACACTTTATATTAACGAATAGTTTATGAATCTATTTAGGTTTAAAAATTGATACAGTTTTATAAGTTACTTTTTCAAAGACTCGTGCTGTCTATTGCATAATGCACTGGAAGGGGAAAAAAAAGGTGCACACGCGTGGCTTTTTCTTGAATTTGCAGTTTGAAAAATAAAGGGTCAAATCGTTGGTAGATACGTTGTTGACACTTCTAAATAAGAGACCTACTAGTAGCGGCCGCTGCA

The resistance gene(kanR) was linked to the target gene(hexa-His, nixA, TgMTP1t2) to screen the engineering yeast and the original yeast.

BBa_K3126009 (pSB1C3-pTEF1/ tCYC1/ hexa-His/ kanR):

Enzyme digestion system:

BBa_K3126005	25 μL
SpeI	3 μL
PstI	3 μL
Cutsmart Buffer	5 μL
ddH₂O	14 μL

BBa_K3126008	25 μL
XbaI	3 μL
PstI	3 μL
Cutsmart Buffer	5 μL
ddH₂O	14 μL

The enzyme system we use:

BBa_K3126005 linear plasmid	2 μL
kanR part	6 μL
T₄ DNA Ligase	0.5 μL
T₄Buffer	1 μL
ddH₂O	0.5 μL

BBa_K3126010 (pSB1C3-pGPM1/tTDH1/ nixA/ kanR)

Enzyme digestion system:

BBa_K3126006	25 μL
SpeI	3 μL
PstI	3 μL
Cutsmart Buffer	5 μL
ddH₂O	14 μL

BBa_K3126008	25 μL
XbaI	3 μL
PstI	3 μL
Cutsmart Buffer	5 μL
ddH₂O	14 μL

The enzyme system we use:

BBa_K3126006 linear plasmid	2 μL
kanR part	4 μL
T₄ DNA Ligase	0.5 μL
T₄Buffer	1 μL
ddH₂O	0.5 μL

BBa_K3126011 (pSB1C3-pTDH3/tPGK1/ TgMTP1t2/ kanR)

Enzyme digestion system:

BBa_K3126007	25 μL
SpeI	3 μL
PstI	3 μL
Cutsmart Buffer	5 μL
ddH₂O	14 μL

BBa_K3126008	25 μL
XbaI	3 μL
PstI	3 μL
Cutsmart Buffer	5 μL
ddH₂O	14 μL

The enzyme system we use:

BBa_K3126007 linear plasmid	2 μL
kanR part	4 μL
T₄ DNA Ligase	0.5 μL
T₄Buffer	1 μL
ddH₂O	0.5 μL

2019.7.1 ~ 7.10

Construction of plasmids for the translation and expression of genes in S. cerevisiae:

GTCCGGCAAAAAAGGGCAAGGTGTCACCACCCTGCCCTTTTTCTTTAAAACCGAAAAGATTACTTCGCGTTATGCAGGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCACAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGCTCGAGGCTTGGATTCTCACCAATAAAAAACGCCCGGCGGCAACCGAGCGTTCTGAACAAATCCAGATGGAGTTCTGAGGTCATTACTGGATCTATCAACAGGAGTCCAAGCGAGCTCGATATCAAATTACGCCCCGCCCTGCCACTCATCGCAGTACTGTTGTAATTCATTAAGCATTCTGCCGACATGGAAGCCATCACAAACGGCATGATGAACCTGAATCGCCAGCGGCATCAGCACCTTGTCGCCTTGCGTATAATATTTGCCCATGGTGAAAACGGGGGCGAAGAAGTTGTCCATATTGGCCACGTTTAAATCAAAACTGGTGAAACTCACCCAGGGATTGGCTGAGACGAAAAACATATTCTCAATAAACCCTTTAGGGAAATAGGCCAGGTTTTCACCGTAACACGCCACATCTTGCGAATATATGTGTAGAAACTGCCGGAAATCGTCGTGGTATTCACTCCAGAGCGATGAAAACGTTTCAGTTTGCTCATGGAAAACGGTGTAACAAGGGTGAACACTATCCCATATCACCAGCTCACCGTCTTTCATTGCCATACGAAATTCCGGATGAGCATTCATCAGGCGGGCAAGAATGTGAATAAAGGCCGGATAAAACTTGTGCTTATTTTTCTTTACGGTCTTTAAAAAGGCCGTAATATCCAGCTGAACGGTCTGGTTATAGGTACATTGAGCAACTGACTGAAATGCCTCAAAATGTTCTTTACGATGCCATTGGGATATATCAACGGTGGTATATCCAGTGATTTTTTTCTCCATTTTAGCTTCCTTAGCTCCTGAAAATCTCGATAACTCAAAAAATACGCCCGGTAGTGATCTTATTTCATTATGGTGAAAGTTGGAACCTCTTACGTGCCCGATCAACTCGAGTGCCACCTGACGTCTAAGAAACCATTATTATCATGACATTAACCTATAAAAATAGGCGTATCACGAGGCAGAATTTCAGATAAAAAAAATCCTTAGCTTTCGCTAAGGATGATTTCTGGAATTCGCGGCCGCTTCTAGAGGGTCTCATGTCTATCCCAGAAACTCAAAAAGGTGTTATCTTCTACGAATCCCCCTTGCCAACAGGGAGTTCTTCAGAGACATGGAGGCTCAAAACGAAATTATTGACAGCCTAGACATCAATAGTCATACAACAGAAAGCGACCACCCAACTTTGGCTGATAATAGCGTATAAACAATGCATACTTTGTACGTTCAAAATACAATGCAGTAGATATATTTATGCATATTACATATAATACATATCACATAGGAAGCAACAGGCGCGTTGGACTTTTAATTTTCGAGGACCGCGAATCCTTACATCACACCCAATCCCCCACAAGTGATCCCCCACACACCATAGCTTCAAAATGTTTCTACTCCTTTTTTACTCTTCCAGATTTTCTCGGACTCCGCGCATCGCCGTACCACTTCAAAACACCCAAGCACAGCATACTAAATTTCCCCTCTTTCTTCCTCTAGGGTGTCGTTAATTACCCGTACTAAAGGTTTGGAAAAGAAAAAAGACACCGCCTCGTTTCTTTTTCTTCGTCGAAAAAGGCAATAAAAATTTTTATCACGTTTCTTTTTCTTGAAAATTTTTTTTTTTGATTTTTTTCTCTTTCGATGACCTCCCATTGATATTTAAGTTAATAAACGGTCATCAATTTCTCAAGTTTCAGTTTCATTTTTCTTGTTCTATTACAACTTTTTTTACTTCTTGCTCATTAGAAAGAAAGCATAGCAATCTAATCTAAGTTTTAATTACAAAGGATCCATGAGATTCCCTAGTATCTTCACCGCCGTCTTGTTCGCTGCTAGTTCTGCTTTGGCTGCTCCAGTCAACACTACCACCGAAGACGAAACCGCTCAGATCCCAGCTGAAGCCGTCATCGGTTACCTTGACCTTGAGGGTGACTTCGATGTCGCCGTCCTTCCATTCTCTAACAGTACCAACAACGGTCTTTTGTTCATTAACACCACCATTGCTTCTATCGCCGCTAAGGAGGAGGGTGTCTCTCTTGACAAGAGACATCACCACCACCATCACAGTGCTAAGTCTAGTTTCATCTCTACCACCACTACCGACCTTACCTCTATCAACACCAGTGCCTACAGTACCGGTTCTATCTCTACCGTCGAAACCGGAAACAGAACCACCTCTGAGGTCATCTCTCATGTCGTCACCACCTCTACCAAGCTTAGTCCTACCGCCACCACCAGTCTTACCATCGCTCAAACTTCTATTTATAGTACCGACTCTAATATTACCGTCGGTACCGACATCCACACCACCAGTGAAGTCATCTCTGACGTCGAAACCATCTCTAGGGAAACCGCCTCTACCGTTGTTGCCGCCCCAACTTCTACCACTGGTTGGACCGGTGCCATGAACACTTACATCTCTCAATTCACTTCTTCTAGTTTTGCTACTATTAACTCTACCCCTATCATCTCTTCTAGTGCCGTCTTCGAAACCAGTGACGCCTCTATCGTCAACGTCCATACCGAGAACATCACCAACACTGCTGCCGTTCCATCTGAGGAGCCTACCTTCGTCAACGCCACTAGAAACTCTCTTAATTCTTTTTGTTCTTCTAAACAACCATCTTCTCCTAGTTCTTATACTTCTTCTCCTTTGGTTTCTTCTTTGTCTGTTTCTAAGACCTTGTTGTCTACCTCTTTCACCCCTTCTGTCCCAACTTCTAATACTTATATTAAGACCAAGAACACTGGTTACTTCGAGCACACTGCCTTGACCACCTCTAGTGTTGGATTGAATAGTTTCTCTGAAACCGCCGTCTCTAGTCAAGGTACCAAGATTGACACCTTTTTGGTTTCTAGTTTGATCGCCTACCCATCTTCTGCCTCTGGTTCTCAGCTTAGTGGTATCCAGCAAAATTTTACCTCTACTTCTTTGATGATCAGTACCTACGAGGGTAAGGCCAGTATCTTCTTCTCTGCCGAGTTGGGTTCTATTATTTTTTTGTTGCTTAGTTATTTGTTGTTTTAAAACGGGTACTGTACAGTTAGTACATTGAGTCGAAATATACGAAATTATTGTTCATAATTTTCATCCTGGCTCTTTTTTTCTTCAACCATAGTTAAATGGACAGTTCATATCTTAACTCTAATAATACTTTTCTAGTTCTTATCCTTTTCCGTCTCACCGCAGATTTTATCATAGTATTAAATTTATATTTTGTTCGTAAAAAGAAAAATTTGTGAGCGTTACCGCTCGTTTCATTACCCGAAGGCTGTTTCAGTAGACCACTGATTAAGTAAGTAGATGAAAAAATTTCATCACCATGAAAGAGTTCGATGAGAGCTACTTTTTCAAATGCTTAACAGCTAACCGCCATTCAATAATGTTACGCTCTCTTCATTCTGCGGCTACGTTATCTAACAAGAGGTTTTACTCTCTCATATCTCATTCAAATAGAAAGAACATAATCAAAAGGATCCTCATGTAATTAGTTATGTCACGCTTACATTCACGCCCTCCCCCCACATCCGCTCTAACCGAAAAGGAAGGAGTTAGACAACCTGAAGTCTAGGTCCCTATTTATTTTTTTATAGTTATGTTAGTATTAAGAACGTTATTTATATTTCAAATTTTTCTTTTTTTTCTGTACAGACGCGTGTACGCATGTAACATTATACTGAAAACCTTGCTTGAGAAGGTTTTGGGACGCTCGAAGGCTTTAATTTGCAGGGCCAAACTTTTCGGTTAACACATGCAGTGATGCACGCGCGATGGTGCTAAGTTACATATATATATATATATATATATATATATATATATAGCCATAGTGATGTCTAAGTAACCTTTATGGTATATTTCTTAATGTGGAAAGATACTAGCGCGCGCACCCACACACAAGCTTCGTCTTTTCTTGAAGAAAAGAGGAAGCTCGCTAAATGGGATTCCACTTTCCGTTCCCTGCCAGCTGATGGAAAAAGGTTAGTGGAACGATGAAGAATAAAAAGAGAGATCCACTGAGGTGAAATTTCAGCTGACAGCGAGTTTCATGATCGTGATGAACAATGGTAACGAGTTGTGGCTGTTGCCAGGGAGGGTGGTTCTCAACTTTTAATGTATGGCCAAATCGCTACTTGGGTTTGTTATATAACAAAGAAGAAATAATGAACTGATTCTCTTCCTCCTTCTTGTCCTTTCTTAATTCTGTTGTAATTACCTTCCTTTGTAATTTTTTTTGTAATTATTCTTCTTAATAATCCAAACAAACACACATATTACAATAGGATCCATGATTAAGTACCATGTCATGAAAGAAGGTTACATCTTGACTGTTTTTAAAAATGAAAGGTTGAGTTGGTTGCCATATATCGCCATCGTCATTTTGTTGCACGTTATTGGTTTCTCTTTCTTGTGGATCGCCGGTAAGGACCATCACATTTTGTTCGGTATGGGTATCCTTGCCTACACTCTTGGTTTGAGGCATGCCTTTGATGCCGACCATATCGCCGCTATCGACAACACCGTTAGAAAGTTGTTGCAGCAGAGAAAGGACCCATCTGGTGTCGGTTTCTACTTCTCTATTGGACATTCTTCTGTCGTCTTCTTGATGGCCGTTTTCCTTGGTGTCTCTGTCAAGTGGGCCAAGGACGAACTTCCTCACTTCCAAGATATCGGAGGTACCATTGGAACCCTTGTTTCTGGTTTTTTCTTGGTTCTTATTGGAGTTCTTAATCTTATTATTCTTATTTCTTTGATTAACTTGTTCGCCAAGTTGAGGAGGGAACACATCGAAGAAGCTGAGGTCGATGCCTTGTTGGAGTCTAGGGGTCTTGTCTCTAGGTTCGTCGGACCATACTTTAAGTTGATCACCAGAAGTTGGCACGTCTTGCCTCTTGGATTCCTTTTCGGATTGGGATTCGACACCGCTTCTGAGATCGCCTTGCTTGCCCTTAGTAGTGGAGCCTCTCAGCAAGCTATCTCTTTCATTGGTATTTTGTCTTTGCCTATCTTGTTCGCCAGTGGTATGAGTCTTCTTGACACCCTTGACGGTGTCGTCATGAAGTACGCCTACAACTGGGCCTTCTTCAACCCTATCAGAAAAATCTATTACAACATTACCATTACCGCCATCTCTGTTATGGCCGCCCTTGTTATCGGTATGATCGAATTGCTTCAAATTCTTGCCGACAAACTTGACTTGCATGGAGCCTTCTGGGCCTTCATTGGAAGTATCGAGTTCGATTATTTGGGTTATATCTTGGTTGCCTTGTTTCTTATTACTTGGTTGATCAGTTCTTTGATTTGGAAATTTGGAAGAATTGAACACAAATGGAGTAGATAAGGATCCATAAAGCAATCTTGATGAGGATAATGATTTTTTTTTGAATATACATAAATACTACCGTTTTTCTGCTAGATTTTGTGATGACGTAAATAAGTACATATTACTTTTTAAGCCAAGACAAGATTAAGCATTAACTTTACCCTTTTCTTTCTAAGTTTCAATATTAGTTATCACTGTTTAAAAGTTATGGCGAGAACGTCGGCGGTTAAAATATATTACCCTGAACGAGGCCTTACTAGAGTTGATAGGTCAAGATCAATGTAAACAATTACTTTGTTATGTAGAGTTTTTTTAGCTACCTATATTCCACCATAACATCAATCATGCGGTTGCTGGTGTATTTACCAATAATGTTTAATGTATATATATATATATATATATGGGGCCGTATACTTACATATAGTAGATGTCAAGCGTAGGCGCTTCCCCTGCCGGCTGTGAGGGCGCCATAACCAAGGTATCTATAGACCGCCAATCAGCAAACTACCTCCGTACATTCATGTTGCACCCACACATTTATACACCCAGACCGCGACAAATTACCCATAAGGTTGTTTGTGACGGCGTCGTACAAGAGAACGTGGGAACTTTTTAGGCTCACCAAAAAAGAAAGAAAAAATACGAGTTGCTGACAGAAGCCTCAAGAAAAAAAAAATTCTTCTTCGACTATGCTGGAGGCAGAGATGATCGAGCCGGTAGTTAACTATATATAGCTAAATTGGTTCCATCACCTTCTTTTCTGGTGTCGCTCCTTCTAGTGCTATTTCTGGCTTTTCCTATTTTTTTTTTTCCATTTTTCTTTCTCTCTTTCTAATATATAAATTCTCTTGCATTTTCTATTTTTCTCTCTATCTATTCTACTTGTTTATTCCCTTCAAGGTTTTTTTTTAAGGAGTACTTGTTTTTAGAATATACGGTCAACGAACTATAATTAACTAAACGGATCCATGGGAAAGGAGAAGACCCACGTCAGTAGACCAAGGCTTAACAGTAACATGGACGCCGACTTGTACGGATACAAGTGGGCCAGAGACAACGTCGGTCAGTCTGGAGCTACCATCTATAGACTTTACGGAAAGCCAGACGCCCCAGAGTTGTTCCTTAAGCACGGTAAGGGATCTGTTGCCAACGACGTCACCGATGAGATGGTTAGACTTAACTGGCTTACCGAGTTCATGCCACTTCCAACCATCAAGCACTTCATTAGAACCCCAGATGACGCTTGGTTGTTGACCACTGCCATCCCCGGTAAGACCGCCTTTCAAGTTTTGGAAGAGTACCCAGACTCTGGAGAGAACATCGTTGACGCCTTGGCCGTCTTCCTTAGGAGGTTGCACTCTATCCCAGTTTGCAACTGCCCATTCAATAGTGATAGAGTCTTCAGACTTGCCCAAGCCCAGTCTAGGATGAACAACGGATTGGTCGATGCCTCTGACTTCGACGACGAGAGAAATGGATGGCCAGTCGAGCAAGTTTGGAAGGAGATGCATAAGCTTTTGCCTTTTTCTCCAGACAGTGTTGTCACCCACGGTGACTTTAGTTTGGACAACCTTATTTTCGACGAGGGTAAATTGATCGGTTGCATCGACGTCGGTAGAGTTGGTATCGCCGATAGATACCAAGACTTGGCCATCTTGTGGAACTGCTTGGGTGAGTTCTCTCCAAGTCTTCAAAAAAGATTGTTCCAAAAATATGGTATTGACAACCCAGATATGAATAAATTGCAATTTCATTTGATGTTGGATGAGTTTTTCTAAGGATCCAGTGCTTTTAACTAAGAATTATTAGTCTTTTCTGCTTATTTTTTCATCATAGTTTAGAACACTTTATATTAACGAATAGTTTATGAATCTATTTAGGTTTAAAAATTGATACAGTTTTATAAGTTACTTTTTCAAAGACTCGTGCTGTCTATTGCATAATGCACTGGAAGGGGAAAAAAAAGGTGCACACGCGTGGCTTTTTCTTGAATTTGCAGTTTGAAAAATAAAGGGTCAAATCGTTGGTAGATACGTTGTTGACACTTCTAAATAAGAGACCTACTAGTAGCGGCCGCTGCA

GTCCGGCAAAAAAGGGCAAGGTGTCACCACCCTGCCCTTTTTCTTTAAAACCGAAAAGATTACTTCGCGTTATGCAGGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCACAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGCTCGAGGCTTGGATTCTCACCAATAAAAAACGCCCGGCGGCAACCGAGCGTTCTGAACAAATCCAGATGGAGTTCTGAGGTCATTACTGGATCTATCAACAGGAGTCCAAGCGAGCTCGATATCAAATTACGCCCCGCCCTGCCACTCATCGCAGTACTGTTGTAATTCATTAAGCATTCTGCCGACATGGAAGCCATCACAAACGGCATGATGAACCTGAATCGCCAGCGGCATCAGCACCTTGTCGCCTTGCGTATAATATTTGCCCATGGTGAAAACGGGGGCGAAGAAGTTGTCCATATTGGCCACGTTTAAATCAAAACTGGTGAAACTCACCCAGGGATTGGCTGAGACGAAAAACATATTCTCAATAAACCCTTTAGGGAAATAGGCCAGGTTTTCACCGTAACACGCCACATCTTGCGAATATATGTGTAGAAACTGCCGGAAATCGTCGTGGTATTCACTCCAGAGCGATGAAAACGTTTCAGTTTGCTCATGGAAAACGGTGTAACAAGGGTGAACACTATCCCATATCACCAGCTCACCGTCTTTCATTGCCATACGAAATTCCGGATGAGCATTCATCAGGCGGGCAAGAATGTGAATAAAGGCCGGATAAAACTTGTGCTTATTTTTCTTTACGGTCTTTAAAAAGGCCGTAATATCCAGCTGAACGGTCTGGTTATAGGTACATTGAGCAACTGACTGAAATGCCTCAAAATGTTCTTTACGATGCCATTGGGATATATCAACGGTGGTATATCCAGTGATTTTTTTCTCCATTTTAGCTTCCTTAGCTCCTGAAAATCTCGATAACTCAAAAAATACGCCCGGTAGTGATCTTATTTCATTATGGTGAAAGTTGGAACCTCTTACGTGCCCGATCAACTCGAGTGCCACCTGACGTCTAAGAAACCATTATTATCATGACATTAACCTATAAAAATAGGCGTATCACGAGGCAGAATTTCAGATAAAAAAAATCCTTAGCTTTCGCTAAGGATGATTTCTGGAATTCGCGGCCGCTTCTAGAGGGTCTCATGTCTATCCCAGAAACTCAAAAAGGTGTTATCTTCTACGAATCCCGCCAAACTTTTCGGTTAACACATGCAGTGATGCACGCGCGATGGTGCTAAGTTACATATATATATATATATATATATATATATATATATAGCCATAGTGATGTCTAAGTAACCTTTATGGTATATTTCTTAATGTGGAAAGATACTAGCGCGCGCACCCACACACAAGCTTCGTCTTTTCTTGAAGAAAAGAGGAAGCTCGCTAAATGGGATTCCACTTTCCGTTCCCTGCCAGCTGATGGAAAAAGGTTAGTGGAACGATGAAGAATAAAAAGAGAGATCCACTGAGGTGAAATTTCAGCTGACAGCGAGTTTCATGATCGTGATGAACAATGGTAACGAGTTGTGGCTGTTGCCAGGGAGGGTGGTTCTCAACTTTTAATGTATGGCCAAATCGCTACTTGGGTTTGTTATATAACAAAGAAGAAATAATGAACTGATTCTCTTCCTCCTTCTTGTCCTTTCTTAATTCTGTTGTAATTACCTTCCTTTGTAATTTTTTTTGTAATTATTCTTCTTAATAATCCAAACAAACACACATATTACAATAGGATCCATGATTAAGTACCATGTCATGAAAGAAGGTTACATCTTGACTGTTTTTAAAAATGAAAGGTTGAGTTGGTTGCCATATATCGCCATCGTCATTTTGTTGCACGTTATTGGTTTCTCTTTCTTGTGGATCGCCGGTAAGGACCATCACATTTTGTTCGGTATGGGTATCCTTGCCTACACTCTTGGTTTGAGGCATGCCTTTGATGCCGACCATATCGCCGCTATCGACAACACCGTTAGAAAGTTGTTGCAGCAGAGAAAGGACCCATCTGGTGTCGGTTTCTACTTCTCTATTGGACATTCTTCTGTCGTCTTCTTGATGGCCGTTTTCCTTGGTGTCTCTGTCAAGTGGGCCAAGGACGAACTTCCTCACTTCCAAGATATCGGAGGTACCATTGGAACCCTTGTTTCTGGTTTTTTCTTGGTTCTTATTGGAGTTCTTAATCTTATTATTCTTATTTCTTTGATTAACTTGTTCGCCAAGTTGAGGAGGGAACACATCGAAGAAGCTGAGGTCGATGCCTTGTTGGAGTCTAGGGGTCTTGTCTCTAGGTTCGTCGGACCATACTTTAAGTTGATCACCAGAAGTTGGCACGTCTTGCCTCTTGGATTCCTTTTCGGATTGGGATTCGACACCGCTTCTGAGATCGCCTTGCTTGCCCTTAGTAGTGGAGCCTCTCAGCAAGCTATCTCTTTCATTGGTATTTTGTCTTTGCCTATCTTGTTCGCCAGTGGTATGAGTCTTCTTGACACCCTTGACGGTGTCGTCATGAAGTACGCCTACAACTGGGCCTTCTTCAACCCTATCAGAAAAATCTATTACAACATTACCATTACCGCCATCTCTGTTATGGCCGCCCTTGTTATCGGTATGATCGAATTGCTTCAAATTCTTGCCGACAAACTTGACTTGCATGGAGCCTTCTGGGCCTTCATTGGAAGTATCGAGTTCGATTATTTGGGTTATATCTTGGTTGCCTTGTTTCTTATTACTTGGTTGATCAGTTCTTTGATTTGGAAATTTGGAAGAATTGAACACAAATGGAGTAGATAAGGATCCATAAAGCAATCTTGATGAGGATAATGATTTTTTTTTGAATATACATAAATACTACCGTTTTTCTGCTAGATTTTGTGATGACGTAAATAAGTACATATTACTTTTTAAGCCAAGACAAGATTAAGCATTAACTTTACCCTTTTCTTTCTAAGTTTCAATATTAGTTATCACTGTTTAAAAGTTATGGCGAGAACGTCGGCGGTTAAAATATATTACCCTGAACGAGGCAGTTCGAGTTTATCATTATCAATACTGCCATTTCAAAGAATACGTAAATAATTAATAGTAGTGATTTTCCTAACTTTATTTAGTCAAAAAATTAGCCTTTTAATTCTGCTGTAACCCGTACATGCCCAAAATAGGGGGCGGGTTACACAGAATATATAACATCGTAGGTGTCTGGGTGAACAGTTTATTCCTGGCATCCACTAAATATAATGGAGCCCGCTTTTTAAGCTGGCATCCAGAAAAAAAAAGAATCCCAGCACCAAAATATTGTTTTCTTCACCAACCATCAGTTCATAGGTCCATTCTCTTAGCGCAACTACAGAGAACAGGGGCACAAACAGGCAAAAAACGGGCACAACCTCAATGGAGTGATGCAACCTGCCTGGAGTAAATGATGACACAAGGCAATTGACCCACGCATGTATCTATCTCATTTTCTTACACCTTCTATTACCTTCTGCTCTCTCTGATTTGGAAAAAGCTGAAAAAAAAGGTTGAAACCAGTTCCCTGAAATTATTCCCCTACTTGACTAATAAGTATATAAAGACGGTAGGTATTGATTGTAATTCTGTAAATCTATTTCTTAAACTTCTTAAATTCTACTTTTATAGTTAGTCTTTTTTTTAGTTTTAAAACACCAAGAACTTAGTTTCGAATAAACACACATAAACAAACAAAGGATCCATGGAGAGTTCTTCTCATATTATTGAAGTCAACGGAGGTAGATCTGACGAGGAAAGAAGGGCTGTCGCTAGTAAGGTCTGCGGAGAAGCTCCTTGCGGTTTCAGTGACGCTAAGAACGCTTCTGGTGACGCCCAAGAAAGGAACGCCTCTATGAGGAAATTGTGCATCGCCGTCGTCTTGTGCCTTGTCTTCATGTCTGTCGAGGTCGTTGGTGGTGTCAAGGCCAACAGTTTGGCCATCATGACCGATGCCGCTCATCTTTTGAGTGACGTTGCCGCTTTCGCCATCTCTTTGTTCAGTCTTTGGGCTGCCGGTTGGGAGGCTACCCCAAGGCACACCTACGGATTCTTCAGAATCGAAATTCTTGGAGCTCTTGTTTCTATCCAATTGATTTGGTTGCTTACTGGTATCCTTGTTTACGAGGCCATCATTAGACTTTTGACCGAAACCTCTGAGGTCAACGGTTTCTTGATGTTCGCTGTCGCCACTTTCGGTTTGCTTGTCAACATTATCATGGCTGTCATGCTTGGTCACGACCATGACAATGGTCACGGTCATAGTCACGGTGAGGACAAACACGATGAAGCCCATGGTGACGTCACTGAACAGCTTCTTGAAAAGCCAAAACAGCAGAAGGAAAAAAAGAAGAGGAACATCAACGCCCAAGGTGCCTATTTGCACGTCTTGGGTGACTCTATCCAGTCTGTCGGAGTCATGATCGGTGGTGCTGCTATCTGGTACAATCCAAAGTGGAAGATCATTGACTTGATCTGCACCTTGGTCTTCTCTGTCATCGTCTTGGGAACCACCATCAATATGATCAGAAGTATTCTTGAGGTCTTGATGGAGAGTACCCCAAGAGAAATCGACGCCACCAAGCTTGAGAAGGGTCTTCTTGAGATGGAGGAGGTCGTCGCTGTTCACGAATTGCACATCTGGGCCTCTACCGTTGGTAAGGTCTTGCTTGCTTGCCATGTCAACGCCAGACCAGATGCCGATGCCGATATGGTCCTTAACAAAGTCGTTGACTATATTAGGAGAGAATATAACATTTCTCATGTTACTATCCAAATTGAAAGATAAGGATCCATTGAATTGAATTGAAATCGATAGATCAATTTTTTTCTTTTCTCTTTCCCCATCCTTTACGCTAAAATAATAGTTTATTTTATTTTTTGAATATTTTTTATTTATATACGTATATATAGACTATTATTTATCTTTTAATGATTATTAAGATTTTTATTAAAAAAAAATTCGCTCCTCTTTTAATGCCTTTATGCAGTTTTTTTTTCCCATTCGATATTTCTATGTAGGCCTTACTAGAGTTGATAGGTCAAGATCAATGTAAACAATTACTTTGTTATGTAGAGTTTTTTTAGCTACCTATATTCCACCATAACATCAATCATGCGGTTGCTGGTGTATTTACCAATAATGTTTAATGTATATATATATATATATATATGGGGCCGTATACTTACATATAGTAGATGTCAAGCGTAGGCGCTTCCCCTGCCGGCTGTGAGGGCGCCATAACCAAGGTATCTATAGACCGCCAATCAGCAAACTACCTCCGTACATTCATGTTGCACCCACACATTTATACACCCAGACCGCGACAAATTACCCATAAGGTTGTTTGTGACGGCGTCGTACAAGAGAACGTGGGAACTTTTTAGGCTCACCAAAAAAGAAAGAAAAAATACGAGTTGCTGACAGAAGCCTCAAGAAAAAAAAAATTCTTCTTCGACTATGCTGGAGGCAGAGATGATCGAGCCGGTAGTTAACTATATATAGCTAAATTGGTTCCATCACCTTCTTTTCTGGTGTCGCTCCTTCTAGTGCTATTTCTGGCTTTTCCTATTTTTTTTTTTCCATTTTTCTTTCTCTCTTTCTAATATATAAATTCTCTTGCATTTTCTATTTTTCTCTCTATCTATTCTACTTGTTTATTCCCTTCAAGGTTTTTTTTTAAGGAGTACTTGTTTTTAGAATATACGGTCAACGAACTATAATTAACTAAACGGATCCATAACTTCGTATAATGTATGCTATACGAAGTTATATGGGAAAGGAGAAGACCCACGTCAGTAGACCAAGGCTTAACAGTAACATGGACGCCGACTTGTACGGATACAAGTGGGCCAGAGACAACGTCGGTCAGTCTGGAGCTACCATCTATAGACTTTACGGAAAGCCAGACGCCCCAGAGTTGTTCCTTAAGCACGGTAAGGGATCTGTTGCCAACGACGTCACCGATGAGATGGTTAGACTTAACTGGCTTACCGAGTTCATGCCACTTCCAACCATCAAGCACTTCATTAGAACCCCAGATGACGCTTGGTTGTTGACCACTGCCATCCCCGGTAAGACCGCCTTTCAAGTTTTGGAAGAGTACCCAGACTCTGGAGAGAACATCGTTGACGCCTTGGCCGTCTTCCTTAGGAGGTTGCACTCTATCCCAGTTTGCAACTGCCCATTCAATAGTGATAGAGTCTTCAGACTTGCCCAAGCCCAGTCTAGGATGAACAACGGATTGGTCGATGCCTCTGACTTCGACGACGAGAGAAATGGATGGCCAGTCGAGCAAGTTTGGAAGGAGATGCATAAGCTTTTGCCTTTTTCTCCAGACAGTGTTGTCACCCACGGTGACTTTAGTTTGGACAACCTTATTTTCGACGAGGGTAAATTGATCGGTTGCATCGACGTCGGTAGAGTTGGTATCGCCGATAGATACCAAGACTTGGCCATCTTGTGGAACTGCTTGGGTGAGTTCTCTCCAAGTCTTCAAAAAAGATTGTTCCAAAAATATGGTATTGACAACCCAGATATGAATAAATTGCAATTTCATTTGATGTTGGATGAGTTTTTCTAAATAACTTCGTATAATGTATGCTATACGAAGTTATGGATCCAGTGCTTTTAACTAAGAATTATTAGTCTTTTCTGCTTATTTTTTCATCATAGTTTAGAACACTTTATATTAACGAATAGTTTATGAATCTATTTAGGTTTAAAAATTGATACAGTTTTATAAGTTACTTTTTCAAAGACTCGTGCTGTCTATTGCATAATGCACTGGAAGGGGAAAAAAAAGGTGCACACGCGTGGCTTTTTCTTGAATTTGCAGTTTGAAAAATAAAGGGTCAAATCGTTGGTAGATACGTTGTTGACACTTCTAAATAAGAGACCTACTAGTAGCGGCCGCTGCA

GTCCGGCAAAAAAGGGCAAGGTGTCACCACCCTGCCCTTTTTCTTTAAAACCGAAAAGATTACTTCGCGTTATGCAGGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCACAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGCTCGAGGCTTGGATTCTCACCAATAAAAAACGCCCGGCGGCAACCGAGCGTTCTGAACAAATCCAGATGGAGTTCTGAGGTCATTACTGGATCTATCAACAGGAGTCCAAGCGAGCTCGATATCAAATTACGCCCCGCCCTGCCACTCATCGCAGTACTGTTGTAATTCATTAAGCATTCTGCCGACATGGAAGCCATCACAAACGGCATGATGAACCTGAATCGCCAGCGGCATCAGCACCTTGTCGCCTTGCGTATAATATTTGCCCATGGTGAAAACGGGGGCGAAGAAGTTGTCCATATTGGCCACGTTTAAATCAAAACTGGTGAAACTCACCCAGGGATTGGCTGAGACGAAAAACATATTCTCAATAAACCCTTTAGGGAAATAGGCCAGGTTTTCACCGTAACACGCCACATCTTGCGAATATATGTGTAGAAACTGCCGGAAATCGTCGTGGTATTCACTCCAGAGCGATGAAAACGTTTCAGTTTGCTCATGGAAAACGGTGTAACAAGGGTGAACACTATCCCATATCACCAGCTCACCGTCTTTCATTGCCATACGAAATTCCGGATGAGCATTCATCAGGCGGGCAAGAATGTGAATAAAGGCCGGATAAAACTTGTGCTTATTTTTCTTTACGGTCTTTAAAAAGGCCGTAATATCCAGCTGAACGGTCTGGTTATAGGTACATTGAGCAACTGACTGAAATGCCTCAAAATGTTCTTTACGATGCCATTGGGATATATCAACGGTGGTATATCCAGTGATTTTTTTCTCCATTTTAGCTTCCTTAGCTCCTGAAAATCTCGATAACTCAAAAAATACGCCCGGTAGTGATCTTATTTCATTATGGTGAAAGTTGGAACCTCTTACGTGCCCGATCAACTCGAGTGCCACCTGACGTCTAAGAAACCATTATTATCATGACATTAACCTATAAAAATAGGCGTATCACGAGGCAGAATTTCAGATAAAAAAAATCCTTAGCTTTCGCTAAGGATGATTTCTGGAATTCGCGGCCGCTTCTAGAGGGTCTCATGTCTATCCCAGAAACTCAAAAAGGTGTTATCTTCTACGAATCCCCCTTGCCAACAGGGAGTTCTTCAGAGACATGGAGGCTCAAAACGAAATTATTGACAGCCTAGACATCAATAGTCATACAACAGAAAGCGACCACCCAACTTTGGCTGATAATAGCGTATAAACAATGCATACTTTGTACGTTCAAAATACAATGCAGTAGATATATTTATGCATATTACATATAATACATATCACATAGGAAGCAACAGGCGCGTTGGACTTTTAATTTTCGAGGACCGCGAATCCTTACATCACACCCAATCCCCCACAAGTGATCCCCCACACACCATAGCTTCAAAATGTTTCTACTCCTTTTTTACTCTTCCAGATTTTCTCGGACTCCGCGCATCGCCGTACCACTTCAAAACACCCAAGCACAGCATACTAAATTTCCCCTCTTTCTTCCTCTAGGGTGTCGTTAATTACCCGTACTAAAGGTTTGGAAAAGAAAAAAGACACCGCCTCGTTTCTTTTTCTTCGTCGAAAAAGGCAATAAAAATTTTTATCACGTTTCTTTTTCTTGAAAATTTTTTTTTTTGATTTTTTTCTCTTTCGATGACCTCCCATTGATATTTAAGTTAATAAACGGTCATCAATTTCTCAAGTTTCAGTTTCATTTTTCTTGTTCTATTACAACTTTTTTTACTTCTTGCTCATTAGAAAGAAAGCATAGCAATCTAATCTAAGTTTTAATTACAAAGGATCCATGAGATTCCCTAGTATCTTCACCGCCGTCTTGTTCGCTGCTAGTTCTGCTTTGGCTGCTCCAGTCAACACTACCACCGAAGACGAAACCGCTCAGATCCCAGCTGAAGCCGTCATCGGTTACCTTGACCTTGAGGGTGACTTCGATGTCGCCGTCCTTCCATTCTCTAACAGTACCAACAACGGTCTTTTGTTCATTAACACCACCATTGCTTCTATCGCCGCTAAGGAGGAGGGTGTCTCTCTTGACAAGAGACATCACCACCACCATCACAGTGCTAAGTCTAGTTTCATCTCTACCACCACTACCGACCTTACCTCTATCAACACCAGTGCCTACAGTACCGGTTCTATCTCTACCGTCGAAACCGGAAACAGAACCACCTCTGAGGTCATCTCTCATGTCGTCACCACCTCTACCAAGCTTAGTCCTACCGCCACCACCAGTCTTACCATCGCTCAAACTTCTATTTATAGTACCGACTCTAATATTACCGTCGGTACCGACATCCACACCACCAGTGAAGTCATCTCTGACGTCGAAACCATCTCTAGGGAAACCGCCTCTACCGTTGTTGCCGCCCCAACTTCTACCACTGGTTGGACCGGTGCCATGAACACTTACATCTCTCAATTCACTTCTTCTAGTTTTGCTACTATTAACTCTACCCCTATCATCTCTTCTAGTGCCGTCTTCGAAACCAGTGACGCCTCTATCGTCAACGTCCATACCGAGAACATCACCAACACTGCTGCCGTTCCATCTGAGGAGCCTACCTTCGTCAACGCCACTAGAAACTCTCTTAATTCTTTTTGTTCTTCTAAACAACCATCTTCTCCTAGTTCTTATACTTCTTCTCCTTTGGTTTCTTCTTTGTCTGTTTCTAAGACCTTGTTGTCTACCTCTTTCACCCCTTCTGTCCCAACTTCTAATACTTATATTAAGACCAAGAACACTGGTTACTTCGAGCACACTGCCTTGACCACCTCTAGTGTTGGATTGAATAGTTTCTCTGAAACCGCCGTCTCTAGTCAAGGTACCAAGATTGACACCTTTTTGGTTTCTAGTTTGATCGCCTACCCATCTTCTGCCTCTGGTTCTCAGCTTAGTGGTATCCAGCAAAATTTTACCTCTACTTCTTTGATGATCAGTACCTACGAGGGTAAGGCCAGTATCTTCTTCTCTGCCGAGTTGGGTTCTATTATTTTTTTGTTGCTTAGTTATTTGTTGTTTTAAAACGGGTACTGTACAGTTAGTACATTGAGTCGAAATATACGAAATTATTGTTCATAATTTTCATCCTGGCTCTTTTTTTCTTCAACCATAGTTAAATGGACAGTTCATATCTTAACTCTAATAATACTTTTCTAGTTCTTATCCTTTTCCGTCTCACCGCAGATTTTATCATAGTATTAAATTTATATTTTGTTCGTAAAAAGAAAAATTTGTGAGCGTTACCGCTCGTTTCATTACCCGAAGGCTGTTTCAGTAGACCACTGATTAAGTAAGTAGATGAAAAAATTTCATCACCATGAAAGAGTTCGATGAGAGCTACTTTTTCAAATGCTTAACAGCTAACCGCCATTCAATAATGTTACGCTCTCTTCATTCTGCGGCTACGTTATCTAACAAGAGGTTTTACTCTCTCATATCTCATTCAAATAGAAAGAACATAATCAAAAGGATCCTCATGTAATTAGTTATGTCACGCTTACATTCACGCCCTCCCCCCACATCCGCTCTAACCGAAAAGGAAGGAGTTAGACAACCTGAAGTCTAGGTCCCTATTTATTTTTTTATAGTTATGTTAGTATTAAGAACGTTATTTATATTTCAAATTTTTCTTTTTTTTCTGTACAGACGCGTGTACGCATGTAACATTATACTGAAAACCTTGCTTGAGAAGGTTTTGGGACGCTCGAAGGCTTTAATTTGCAGGGCCAAACTTTTCGGTTAACACATGCAGTGATGCACGCGCGATGGTGCTAAGTTACATATATATATATATATATATATATATATATATATAGCCATAGTGATGTCTAAGTAACCTTTATGGTATATTTCTTAATGTGGAAAGATACTAGCGCGCGCACCCACACACAAGCTTCGTCTTTTCTTGAAGAAAAGAGGAAGCTCGCTAAATGGGATTCCACTTTCCGTTCCCTGCCAGCTGATGGAAAAAGGTTAGTGGAACGATGAAGAATAAAAAGAGAGATCCACTGAGGTGAAATTTCAGCTGACAGCGAGTTTCATGATCGTGATGAACAATGGTAACGAGTTGTGGCTGTTGCCAGGGAGGGTGGTTCTCAACTTTTAATGTATGGCCAAATCGCTACTTGGGTTTGTTATATAACAAAGAAGAAATAATGAACTGATTCTCTTCCTCCTTCTTGTCCTTTCTTAATTCTGTTGTAATTACCTTCCTTTGTAATTTTTTTTGTAATTATTCTTCTTAATAATCCAAACAAACACACATATTACAATAGGATCCATGATTAAGTACCATGTCATGAAAGAAGGTTACATCTTGACTGTTTTTAAAAATGAAAGGTTGAGTTGGTTGCCATATATCGCCATCGTCATTTTGTTGCACGTTATTGGTTTCTCTTTCTTGTGGATCGCCGGTAAGGACCATCACATTTTGTTCGGTATGGGTATCCTTGCCTACACTCTTGGTTTGAGGCATGCCTTTGATGCCGACCATATCGCCGCTATCGACAACACCGTTAGAAAGTTGTTGCAGCAGAGAAAGGACCCATCTGGTGTCGGTTTCTACTTCTCTATTGGACATTCTTCTGTCGTCTTCTTGATGGCCGTTTTCCTTGGTGTCTCTGTCAAGTGGGCCAAGGACGAACTTCCTCACTTCCAAGATATCGGAGGTACCATTGGAACCCTTGTTTCTGGTTTTTTCTTGGTTCTTATTGGAGTTCTTAATCTTATTATTCTTATTTCTTTGATTAACTTGTTCGCCAAGTTGAGGAGGGAACACATCGAAGAAGCTGAGGTCGATGCCTTGTTGGAGTCTAGGGGTCTTGTCTCTAGGTTCGTCGGACCATACTTTAAGTTGATCACCAGAAGTTGGCACGTCTTGCCTCTTGGATTCCTTTTCGGATTGGGATTCGACACCGCTTCTGAGATCGCCTTGCTTGCCCTTAGTAGTGGAGCCTCTCAGCAAGCTATCTCTTTCATTGGTATTTTGTCTTTGCCTATCTTGTTCGCCAGTGGTATGAGTCTTCTTGACACCCTTGACGGTGTCGTCATGAAGTACGCCTACAACTGGGCCTTCTTCAACCCTATCAGAAAAATCTATTACAACATTACCATTACCGCCATCTCTGTTATGGCCGCCCTTGTTATCGGTATGATCGAATTGCTTCAAATTCTTGCCGACAAACTTGACTTGCATGGAGCCTTCTGGGCCTTCATTGGAAGTATCGAGTTCGATTATTTGGGTTATATCTTGGTTGCCTTGTTTCTTATTACTTGGTTGATCAGTTCTTTGATTTGGAAATTTGGAAGAATTGAACACAAATGGAGTAGATAAGGATCCATAAAGCAATCTTGATGAGGATAATGATTTTTTTTTGAATATACATAAATACTACCGTTTTTCTGCTAGATTTTGTGATGACGTAAATAAGTACATATTACTTTTTAAGCCAAGACAAGATTAAGCATTAACTTTACCCTTTTCTTTCTAAGTTTCAATATTAGTTATCACTGTTTAAAAGTTATGGCGAGAACGTCGGCGGTTAAAATATATTACCCTGAACGAGGCAGTTCGAGTTTATCATTATCAATACTGCCATTTCAAAGAATACGTAAATAATTAATAGTAGTGATTTTCCTAACTTTATTTAGTCAAAAAATTAGCCTTTTAATTCTGCTGTAACCCGTACATGCCCAAAATAGGGGGCGGGTTACACAGAATATATAACATCGTAGGTGTCTGGGTGAACAGTTTATTCCTGGCATCCACTAAATATAATGGAGCCCGCTTTTTAAGCTGGCATCCAGAAAAAAAAAGAATCCCAGCACCAAAATATTGTTTTCTTCACCAACCATCAGTTCATAGGTCCATTCTCTTAGCGCAACTACAGAGAACAGGGGCACAAACAGGCAAAAAACGGGCACAACCTCAATGGAGTGATGCAACCTGCCTGGAGTAAATGATGACACAAGGCAATTGACCCACGCATGTATCTATCTCATTTTCTTACACCTTCTATTACCTTCTGCTCTCTCTGATTTGGAAAAAGCTGAAAAAAAAGGTTGAAACCAGTTCCCTGAAATTATTCCCCTACTTGACTAATAAGTATATAAAGACGGTAGGTATTGATTGTAATTCTGTAAATCTATTTCTTAAACTTCTTAAATTCTACTTTTATAGTTAGTCTTTTTTTTAGTTTTAAAACACCAAGAACTTAGTTTCGAATAAACACACATAAACAAACAAAGGATCCATGGAGAGTTCTTCTCATATTATTGAAGTCAACGGAGGTAGATCTGACGAGGAAAGAAGGGCTGTCGCTAGTAAGGTCTGCGGAGAAGCTCCTTGCGGTTTCAGTGACGCTAAGAACGCTTCTGGTGACGCCCAAGAAAGGAACGCCTCTATGAGGAAATTGTGCATCGCCGTCGTCTTGTGCCTTGTCTTCATGTCTGTCGAGGTCGTTGGTGGTGTCAAGGCCAACAGTTTGGCCATCATGACCGATGCCGCTCATCTTTTGAGTGACGTTGCCGCTTTCGCCATCTCTTTGTTCAGTCTTTGGGCTGCCGGTTGGGAGGCTACCCCAAGGCACACCTACGGATTCTTCAGAATCGAAATTCTTGGAGCTCTTGTTTCTATCCAATTGATTTGGTTGCTTACTGGTATCCTTGTTTACGAGGCCATCATTAGACTTTTGACCGAAACCTCTGAGGTCAACGGTTTCTTGATGTTCGCTGTCGCCACTTTCGGTTTGCTTGTCAACATTATCATGGCTGTCATGCTTGGTCACGACCATGACAATGGTCACGGTCATAGTCACGGTGAGGACAAACACGATGAAGCCCATGGTGACGTCACTGAACAGCTTCTTGAAAAGCCAAAACAGCAGAAGGAAAAAAAGAAGAGGAACATCAACGCCCAAGGTGCCTATTTGCACGTCTTGGGTGACTCTATCCAGTCTGTCGGAGTCATGATCGGTGGTGCTGCTATCTGGTACAATCCAAAGTGGAAGATCATTGACTTGATCTGCACCTTGGTCTTCTCTGTCATCGTCTTGGGAACCACCATCAATATGATCAGAAGTATTCTTGAGGTCTTGATGGAGAGTACCCCAAGAGAAATCGACGCCACCAAGCTTGAGAAGGGTCTTCTTGAGATGGAGGAGGTCGTCGCTGTTCACGAATTGCACATCTGGGCCTCTACCGTTGGTAAGGTCTTGCTTGCTTGCCATGTCAACGCCAGACCAGATGCCGATGCCGATATGGTCCTTAACAAAGTCGTTGACTATATTAGGAGAGAATATAACATTTCTCATGTTACTATCCAAATTGAAAGATAAGGATCCATTGAATTGAATTGAAATCGATAGATCAATTTTTTTCTTTTCTCTTTCCCCATCCTTTACGCTAAAATAATAGTTTATTTTATTTTTTGAATATTTTTTATTTATATACGTATATATAGACTATTATTTATCTTTTAATGATTATTAAGATTTTTATTAAAAAAAAATTCGCTCCTCTTTTAATGCCTTTATGCAGTTTTTTTTTCCCATTCGATATTTCTATGTAGGCCTTACTAGAGTTGATAGGTCAAGATCAATGTAAACAATTACTTTGTTATGTAGAGTTTTTTTAGCTACCTATATTCCACCATAACATCAATCATGCGGTTGCTGGTGTATTTACCAATAATGTTTAATGTATATATATATATATATATATGGGGCCGTATACTTACATATAGTAGATGTCAAGCGTAGGCGCTTCCCCTGCCGGCTGTGAGGGCGCCATAACCAAGGTATCTATAGACCGCCAATCAGCAAACTACCTCCGTACATTCATGTTGCACCCACACATTTATACACCCAGACCGCGACAAATTACCCATAAGGTTGTTTGTGACGGCGTCGTACAAGAGAACGTGGGAACTTTTTAGGCTCACCAAAAAAGAAAGAAAAAATACGAGTTGCTGACAGAAGCCTCAAGAAAAAAAAAATTCTTCTTCGACTATGCTGGAGGCAGAGATGATCGAGCCGGTAGTTAACTATATATAGCTAAATTGGTTCCATCACCTTCTTTTCTGGTGTCGCTCCTTCTAGTGCTATTTCTGGCTTTTCCTATTTTTTTTTTTCCATTTTTCTTTCTCTCTTTCTAATATATAAATTCTCTTGCATTTTCTATTTTTCTCTCTATCTATTCTACTTGTTTATTCCCTTCAAGGTTTTTTTTTAAGGAGTACTTGTTTTTAGAATATACGGTCAACGAACTATAATTAACTAAACGGATCCATAACTTCGTATAATGTATGCTATACGAAGTTATATGGGAAAGGAGAAGACCCACGTCAGTAGACCAAGGCTTAACAGTAACATGGACGCCGACTTGTACGGATACAAGTGGGCCAGAGACAACGTCGGTCAGTCTGGAGCTACCATCTATAGACTTTACGGAAAGCCAGACGCCCCAGAGTTGTTCCTTAAGCACGGTAAGGGATCTGTTGCCAACGACGTCACCGATGAGATGGTTAGACTTAACTGGCTTACCGAGTTCATGCCACTTCCAACCATCAAGCACTTCATTAGAACCCCAGATGACGCTTGGTTGTTGACCACTGCCATCCCCGGTAAGACCGCCTTTCAAGTTTTGGAAGAGTACCCAGACTCTGGAGAGAACATCGTTGACGCCTTGGCCGTCTTCCTTAGGAGGTTGCACTCTATCCCAGTTTGCAACTGCCCATTCAATAGTGATAGAGTCTTCAGACTTGCCCAAGCCCAGTCTAGGATGAACAACGGATTGGTCGATGCCTCTGACTTCGACGACGAGAGAAATGGATGGCCAGTCGAGCAAGTTTGGAAGGAGATGCATAAGCTTTTGCCTTTTTCTCCAGACAGTGTTGTCACCCACGGTGACTTTAGTTTGGACAACCTTATTTTCGACGAGGGTAAATTGATCGGTTGCATCGACGTCGGTAGAGTTGGTATCGCCGATAGATACCAAGACTTGGCCATCTTGTGGAACTGCTTGGGTGAGTTCTCTCCAAGTCTTCAAAAAAGATTGTTCCAAAAATATGGTATTGACAACCCAGATATGAATAAATTGCAATTTCATTTGATGTTGGATGAGTTTTTCTAAATAACTTCGTATAATGTATGCTATACGAAGTTATGGATCCAGTGCTTTTAACTAAGAATTATTAGTCTTTTCTGCTTATTTTTTCATCATAGTTTAGAACACTTTATATTAACGAATAGTTTATGAATCTATTTAGGTTTAAAAATTGATACAGTTTTATAAGTTACTTTTTCAAAGACTCGTGCTGTCTATTGCATAATGCACTGGAAGGGGAAAAAAAAGGTGCACACGCGTGGCTTTTTCTTGAATTTGCAGTTTGAAAAATAAAGGGTCAAATCGTTGGTAGATACGTTGTTGACACTTCTAAATAAGAGACCTACTAGTAGCGGCCGCTGCA

We obtained the fragments to be inserted by PCR, then combine several target genes by seamless cloning.

BBa_K3126012 (pSB1C3- hexa-His/ nixA/ kanR):

The PCR system of pGPM1-nixA-tTDH1:

(P-nixA-T_F

CGAAGGCTTTAATTTGCAGGGCCAAACTTTTCGGTTAACA

P-nixA-T_R

ACCTATCAACTCTAGTAAGGCCTCGTTCAGGGTAATATATTTT)

BBa_K3126006/SpeⅠ PstⅠ	1 μL
P-nixA-T_F	2 μL
P-nixA-T_R	2 μL
2×PCR mix	20 μL
ddH₂O	15 μL

Enzyme digestion system:

BBa_K3126009	15 μL
StuI	3 μL
buffer	5 μL
ddH₂O	27 μL

Seamless cloning system:

BBa_K3126009/StuⅠ	2 μL
pGPM1-nixA-tTDH1	4 μL
5×CEⅡ Buffer	2 μL
Exnase Ⅱ	1 μL
ddH₂O	1 μL

BBa_K3126013 (pSB1C3- nixA/ TgMTP1t2/ kanR)

The PCR system of pTDH3-TgMTP1t2-tPGK1

BBa_K3126007/SpeⅠ PstⅠ	1 μL
P-TgMTP1t2-T_F	2 μL
P-TgMTP1t2-T_R	2 μL
2×PCR mix	20 μL
ddH₂O	15 μL

Enzyme digestion system:

BBa_K3126010	15 μL
Stu>I	3 μL
buffer	5 μL
ddH₂O	27 μL

Seamless cloning system:

BBa_K3126010/StuⅠ	2 μL
pTDH3-TgMTP1t2-tPGK1	4 μL
5×CEⅡ Buffer	2 μL
Exnase Ⅱ	1 μL
ddH₂O	1 μL

BBa_K3126014 (pSB1C3- hexa-His/ nixA/ TgMTP1t2/ kanR)

Enzyme digestion system:

BBa_K3126012	15 μL
StuI	3 μL
buffer	5 μL
ddH₂O	27 μL

Seamless cloning system:

BBa_K3126012/StuⅠ	2 μL
pTDH3-TgMTP1t2-tPGK1	4 μL
5×CEⅡ Buffer	2 μL
Exnase Ⅱ	1 μL
ddH₂O	1 μL

2019.7.20 ~ 7.25

The plasmid is digested with Bsa1 to get the fragment to be integrated.

pSB1C3- hexa-His- kanR/ BsaⅠ

Enzyme digestion system:

BBa_K3126009	25μL
BsaI	3 μL
buffer	5 μL
ddH₂O	17 μL

pSB1C3-nixA- kanR/ BsaⅠ

Enzyme digestion system:

BBa_K31260010	25μL
BsaI	3 μL
buffer	5 μL
ddH₂O	17 μL

pSB1C3-TgMTP1t2- kanR/ BsaⅠ

Enzyme digestion system:

BBa_K31260011	25μL
BsaI	3 μL
buffer	5 μL
ddH₂O	17 μL

pSB1C3-hexa-His-nixA- kanR/ BsaⅠ

Enzyme digestion system:

BBa_K31260012	25μL
BsaI	3 μL
buffer	5 μL
ddH₂O	17 μL

pSB1C3-nixA-TgMTP1t2- kanR/ BsaⅠ

Enzyme digestion system:

BBa_K31260013	25μL
BsaI	3 μL
buffer	5 μL
ddH₂O	17 μL

pSB1C3-hexa-His-nixA-TgMTP1t2- kanR/ BsaⅠ

Enzyme digestion system:

BBa_K31260014	25μL
BsaI	3 μL
buffer	5 μL
ddH₂O	17 μL

2019.7.25 ~ 8.5

The fragments were transformed into S. cerevisiae to express the corresponding protein.

option date

Notebook
- {{item.data}}

Team:HBUT-China/Notebook

2019.5

We synthesized:

BBa_K3126001 (promoter TEF1)

BBa_K3126002 (promoter GPM1)

BBa_K3126003 (promoter TDH3)

BBa_K3126004 (promoter TEF2)

BBa_K3126005 (hexa-His gene)

BBa_K3126006 (nixA gene)

BBa_K3126007 (TgMTP1t2 gene)

BBa_K3126008 (kanR gene)

BBa_K3126010 (terminator CYC1)

BBa_K3126011 (terminator TDH1)

BBa_K3126013 (terminator ENO2)

2019.6.1 ~ 6.10

Construction plasmids：

pSB1C3-pTEF1/tCYC1

pSB1C3-pGPM1/tTDH1

pSB1C3-pTDH3/tPGK1

2019.6.10 ~ 6.20

Construction plasmids：

BBa_K3126005 (pSB1C3-pTEF1/ tCYC1/ hexa-His)

BBa_K3126006 (pSB1C3-pGPM1/tTDH1/ nixA)

BBa_K3126007 (pSB1C3-pTDH3/tPGK1/ TgMTP1t2)

BBa_K3126008 (pSB1C3-pTEF2/tENO2/ kanR)

2019.6.20 ~ 6.30

Construction of plasmids for the translation and expression of genes in S. cerevisiae:

BBa_K3126009 (pSB1C3-pTEF1/ tCYC1/ hexa-His/ kanR)

BBa_K3126010 (pSB1C3-pGPM1/tTDH1/ nixA/ kanR)

BBa_K3126011 (pSB1C3-pTDH3/tPGK1/ TgMTP1t2/ kanR)

2019.7.1 ~ 7.10

Construction of plasmids for the translation and expression of genes in S. cerevisiae:

BBa_K3126012 (pSB1C3- hexa-His/ nixA/ kanR)

BBa_K3126013 (pSB1C3- nixA/ TgMTP1t2/ kanR)

BBa_K3126014 (pSB1C3- hexa-His/ nixA/ TgMTP1t2/ kanR)

2019.7.20 ~ 7.25

The plasmid is digested with Bsa1 to get the fragment to be integrated.

2019.7.25 ~ 8.5

The fragments were transformed into S. cerevisiae to express the corresponding protein.

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